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マウス切歯の伸長に働く増殖因子の解析-歯牙再生の臨床応用に向けて-

影响小鼠门牙伸长的生长因子分析-走向牙齿再生的临床应用-

基本信息

批准号：
15791064
负责人：
網田陽子
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

マウス胎仔下顎骨より切歯歯胚を摘出し、コラゲナーゼ処理により上皮と間葉に分離した後、apical budを切断し、エナメル芽細胞を得た。Apical bud由来のエナメル芽細胞は単独で培養するよりも、周辺の間葉系細胞とともに培養した方が細胞の継代が安定していた。これまでの報告から、単独培養ではアポトーシスが誘導されている可能性が考えられたので、生存シグナル分子であるPI3キナーゼの下流分子であるAktのリン酸化レベルをウエスタンブロット法で確認した。すると、Aktリン酸化レベルは明らかに共培養系で上昇するという結果を得た。さらに、抗アポトーシス作用を持つ蛋白質のうち、Bcl-2のmRNAレベルが共培養系で上昇していた。そこで、PI3キナーゼの特異的阻害剤であるwortmaninnおよびLY294002を共培養系の培養上清に添加して、その影響を検証した。すると、apical bud由来のエナメル芽細胞のアポトーシスは著しく促進され、Aktのリン酸化レベルとBcl-2mRNAレベルは著明に低下した。これらの結果は、間葉系由来のシグナル(細胞接触もしくは増殖因子)がPI3キナーゼを活性化し、Bcl-2発現上昇によってアポトーシスを抑制する事を示唆している。前年度に、マウスの切歯の周辺において、endotherial nitric oxide synthease (eNOS)とニトロ化チロシン(eNOSにより生成したNOが蛋白質と反応して生じたと考えられる)の発現を免疫組織染色により確認しており、apical budの幹細胞がeNOSによって活性化されている可能性を示唆している事を報告した。今後、apical budにおけるeNOSとPI3キナーゼを介した抗アポトーシス作用の関係を検証していく必要がある。

The mandible was cut off and the epithelium and mesenchymal cells were isolated. Apical bud is derived from a cell line that is cultured independently, and peripheral mesenchymal cells are cultured independently. This report describes the possibility of induction in isolated cultures, and confirms the existence of a variety of downstream molecules. The results of the co-culture system were obtained. In addition, the anti-apoptosis effect of Bcl-2 mRNA increased in the co-culture system. The effects of the addition of specific inhibitors to the culture supernatant of the co-culture system LY294002 were investigated. The expression of Bcl-2mRNA in apical bud cells was significantly lower than that in normal cells. These results suggest that the origin of mesenchymal stem cells (cell contact factors), the activation of PI-3 and the inhibition of Bcl-2 expression may be involved. In the past year, it has been reported that there is a possibility that stem cells from apical buds may be activated by endothelial nitric oxide synthase (eNOS) and protein production. In the future, apical bud will be used to detect the relationship between eNOS and PI3.