象牙芽・エナメル芽細胞標識マウスの象牙質及びエナメル質形成不全の構造と遺伝子解析

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我々は象牙芽細胞及びエナメル芽細胞を別々の蛍光で標識し、象牙芽細胞やエナメル芽細胞を単離、同定するために象牙芽細胞特異的遺伝子dentin sialophosphoprotein及びエナメル芽細胞特異的遺伝Amelogenin-Xの遺伝子座に蛍光タンパクを挿入した遺伝子組換えマウスを作製した。これらのマウスは象牙芽細胞及びエナメル芽細胞を別々の蛍光で標識できることに加え 、象牙質形成不全やエナメル質形成不全を示した。そこで、象牙芽細胞やエナメル芽細胞がこれらの疾患にどのように関わり、どのような遺伝子発現変化や性状変化を示すか、組織切片、micro-CT、走査型電子顕微鏡やRamanレーザー顕微鏡等を用いて象牙質の構造変化について検討した。[1] マイクロCT、走査型電子顕微鏡、Ramanレーザー顕微鏡等を用いてAMELX欠損、DSPP欠損、両欠損したマウスのエナメル質及び象牙質の硬度や性状解析を行ない、特にDSPP欠損マウスの象牙質で基質の変化が起きていることがわかった。[2]上記の3種類のマウスのエナメル質および象牙質の硬度変化が修復象牙質によるか、骨様組織によるか或はエナメルmatrix分泌異常によるかを明らかにする為に蛍光標識された象牙芽細胞と象牙質をDSPP, DMP, OPN, BSP, AMBN等の抗体を用いて組織学的に検討し、その違いを明らかにした。[3]上記３種類のマウスの象牙質の硬度変化が発生時の象牙芽細胞やエナメル芽細胞の遺伝子発現変化に起因するかを調べるために、歯髄を単離し、リアルタイムPCR法にて硬組織関連遺伝子、dentin matrix、enamel matrixタンパク関連遺伝子の発現を検討し、違いを明らかにした。[4] Tamoxifen投与にて象牙芽細胞特異的にCreを発現できるマウスとCre-LoxPによりジフテリア毒素受容体（DTR）遺伝子を発現誘導できるマウスを用いて象牙芽細胞を消失させた際の２次象牙質誘導の有無と象牙質の硬さについてマイクロCT 解析及び凍結切片を用いた解析を開始した。