象牙芽・エナメル芽細胞標識マウスの象牙質及びエナメル質形成不全の構造と遺伝子解析

成牙本质细胞/成釉细胞标记小鼠牙本质和牙釉质发育不全的结构和遗传分析

基本信息

批准号：
22K09901
负责人：
山崎英俊
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Mie University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

我々は象牙芽細胞及びエナメル芽細胞を別々の蛍光で標識し、象牙芽細胞やエナメル芽細胞を単離、同定するために象牙芽細胞特異的遺伝子dentin sialophosphoprotein及びエナメル芽細胞特異的遺伝Amelogenin-Xの遺伝子座に蛍光タンパクを挿入した遺伝子組換えマウスを作製した。これらのマウスは象牙芽細胞及びエナメル芽細胞を別々の蛍光で標識できることに加え、象牙質形成不全やエナメル質形成不全を示した。そこで、象牙芽細胞やエナメル芽細胞がこれらの疾患にどのように関わり、どのような遺伝子発現変化や性状変化を示すか、組織切片、micro-CT、走査型電子顕微鏡やRamanレーザー顕微鏡等を用いて象牙質の構造変化について検討した。[1] マイクロCT、走査型電子顕微鏡、Ramanレーザー顕微鏡等を用いてAMELX欠損、DSPP欠損、両欠損したマウスのエナメル質及び象牙質の硬度や性状解析を行ない、特にDSPP欠損マウスの象牙質で基質の変化が起きていることがわかった。[2]上記の3種類のマウスのエナメル質および象牙質の硬度変化が修復象牙質によるか、骨様組織によるか或はエナメルmatrix分泌異常によるかを明らかにする為に蛍光標識された象牙芽細胞と象牙質をDSPP, DMP, OPN, BSP, AMBN等の抗体を用いて組織学的に検討し、その違いを明らかにした。[3]上記３種類のマウスの象牙質の硬度変化が発生時の象牙芽細胞やエナメル芽細胞の遺伝子発現変化に起因するかを調べるために、歯髄を単離し、リアルタイムPCR法にて硬組織関連遺伝子、dentin matrix、enamel matrixタンパク関連遺伝子の発現を検討し、違いを明らかにした。[4] Tamoxifen投与にて象牙芽細胞特異的にCreを発現できるマウスとCre-LoxPによりジフテリア毒素受容体（DTR）遺伝子を発現誘導できるマウスを用いて象牙芽細胞を消失させた際の２次象牙質誘導の有無と象牙質の硬さについてマイクロCT 解析及び凍結切片を用いた解析を開始した。

我们创建了重组小鼠，其中将牙本质细胞和搪瓷芽标记为单独的荧光荧光，并将荧光蛋白插入到Odontoblast特异性基因dentin sialophophopotin和eNATIC AMELEGIC AMELEGIN-XCOMEN-BLAST-BLAST-BLAST-BLAST-BLAST-geneTy Amelogen-X的基因座中，以隔离和构造Odontoblasts和Odonmelllasts。这些小鼠能够用独立的荧光以及牙本质和牙釉质发育不良标记牙胶细胞和搪瓷爆炸。因此，我们研究了牙本质细胞和牙釉质爆炸与这些疾病的相互作用，以及使用组织切片，微CT，扫描电子显微镜，拉曼激光显微镜等研究了基因表达和特性的变化以及牙本质的结构变化。 [1]我们分析了Amelx缺乏剂，DSPP缺乏剂和两只具有缺陷的小鼠的搪瓷和牙本质的硬度和特性，使用微观扫描，扫描电子显微镜，拉曼激光显微镜等，并发现底物发生在DSPP缺乏小鼠的牙本质中。 [2]为了澄清上述三种类型的牙釉质和牙本质的硬度变化是由修复的牙本质，骨状组织或异常的搪瓷基质分泌引起的，使用诸如DSPP，dmp，opn，bys anm by Ambn等抗体在组织学上检查了荧光细胞和牙本质的荧光标记。 [3]为了研究上述三种小鼠的牙本质硬度的变化是否是由Odontoblasts和牙釉质基质细胞中基因表达的变化引起的，并在发育时分离纸浆，并且与硬组织相关的基因，牙本质基质和牙釉质蛋白质蛋白质蛋白质相关基因的表达通过实时实时的PRCR进行了研究。 [4]当使用可以通过Cre-lo-loxp诱导二脂蛋白受体（DTR）基因的二脂肪细胞表达的小鼠和小鼠，使用可以特异性地表达odontotoblasts和小鼠的小鼠丢失牙糖细胞时，启动了MicroCT分析和冷冻分析，以进行继发性牙本质诱导或不存在牙本质的硬度和牙本质的硬度。