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象牙芽・エナメル芽細胞標識マウスの象牙質及びエナメル質形成不全の構造と遺伝子解析

成牙本质细胞/成釉细胞标记小鼠牙本质和牙釉质发育不全的结构和遗传分析

基本信息

批准号：
22K09901
负责人：
山崎英俊
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Mie University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

我々は象牙芽細胞及びエナメル芽細胞を別々の蛍光で標識し、象牙芽細胞やエナメル芽細胞を単離、同定するために象牙芽細胞特異的遺伝子dentin sialophosphoprotein及びエナメル芽細胞特異的遺伝Amelogenin-Xの遺伝子座に蛍光タンパクを挿入した遺伝子組換えマウスを作製した。これらのマウスは象牙芽細胞及びエナメル芽細胞を別々の蛍光で標識できることに加え、象牙質形成不全やエナメル質形成不全を示した。そこで、象牙芽細胞やエナメル芽細胞がこれらの疾患にどのように関わり、どのような遺伝子発現変化や性状変化を示すか、組織切片、micro-CT、走査型電子顕微鏡やRamanレーザー顕微鏡等を用いて象牙質の構造変化について検討した。[1] マイクロCT、走査型電子顕微鏡、Ramanレーザー顕微鏡等を用いてAMELX欠損、DSPP欠損、両欠損したマウスのエナメル質及び象牙質の硬度や性状解析を行ない、特にDSPP欠損マウスの象牙質で基質の変化が起きていることがわかった。[2]上記の3種類のマウスのエナメル質および象牙質の硬度変化が修復象牙質によるか、骨様組織によるか或はエナメルmatrix分泌異常によるかを明らかにする為に蛍光標識された象牙芽細胞と象牙質をDSPP, DMP, OPN, BSP, AMBN等の抗体を用いて組織学的に検討し、その違いを明らかにした。[3]上記３種類のマウスの象牙質の硬度変化が発生時の象牙芽細胞やエナメル芽細胞の遺伝子発現変化に起因するかを調べるために、歯髄を単離し、リアルタイムPCR法にて硬組織関連遺伝子、dentin matrix、enamel matrixタンパク関連遺伝子の発現を検討し、違いを明らかにした。[4] Tamoxifen投与にて象牙芽細胞特異的にCreを発現できるマウスとCre-LoxPによりジフテリア毒素受容体（DTR）遺伝子を発現誘導できるマウスを用いて象牙芽細胞を消失させた際の２次象牙質誘導の有無と象牙質の硬さについてマイクロCT 解析及び凍結切片を用いた解析を開始した。

We identify ivory bud cells and their differentiation by light, isolate and identify ivory bud cells, identify ivory bud cell-specific genes, dentin sialophosphoprotein, and control ivory bud cell-specific genes, Amelogenin-X gene loci. The difference between ivory bud cells and ivory bud cells is marked by the presence of an incomplete dentin formation and an incomplete dentin formation. The structural transformation of dentin was studied by means of histological section, micro-CT, scanning electron microscope, Raman microscope, etc. [1]The hardness and properties analysis of AMELX, DSPP and Dentin are performed by using CT, scanning electron microscope, Raman microscope, etc. [2]The above three types of dentin and ivory hardness change, repair of dentin, bone tissue, or abnormal secretion of matrix, are identified by light for identification of ivory bud cells and dentin, DSPP, DMP, OPN, BSP, AMBN, etc., and histological examination and other violations. [3]The above three types of dentin hardness changes during the development of ivory bud cells and ivory bud cells are described. The causes of gene development in ivory bud cells are discussed in detail. The development of hard tissue-related genes, dentin matrix and enamel matrix is discussed in detail by PCR. [4]Tamoxifen injection and ivory bud cell-specific Cre detection and induction of toxin receptor (DTR) gene in ivory bud cells-induced secondary dentin induction and dentin hardness analysis and frozen section analysis