プロテオーム解析を用いた新規エナメル芽細胞分化誘導因子の検索

利用蛋白质组分析寻找新型成釉细胞分化诱导因子

• 批准号: 20890150
• 负责人: 阿部 佳織
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20890150/
• 关键词: エナメル芽細胞; 分化; プロテオーム

エナメル芽細胞の新規分化誘導因子を検索するため、まず初めに、レーザーマイクロダイセクション(LMD)を用いて組織切片上のエナメル芽細胞を正確に採取する条件の検討を行った。最終的にはヒトの埋伏智歯を材料として用いる予定であるが、サンプルの確保が困難であるため、予備実験としてSDラット(生後1日齢)の下顎切歯を用いた。採取した下顎骨をOCTコンパウンドに包埋し、ドライアイスエタノールで凍結し、未固定非脱灰凍結切片を作成した。なお、染色には、後に行う液体クロマトグラフィータンデム質量分析(LC-MS/MS)への影響が少ないヘマトキシリンのみを用いた。種々の厚みの切片やレーザー強度を試した結果、エナメル芽細胞の採取を行うための最適なLMDの条件を見出した。続いて、LC-MS/MS解析の予備実験として、大量の採取が容易な歯原性上皮細胞全体をサンプルに用いて、切片作成時やLMD時のケラチンの混入の有無、必要とする蛋白質の量、蛋白質の検出感度について検討を行った。5μgの蛋白質を用いてLC-MS/MSを行った結果、ケラチンの混入がわずかに認められたが、101個の蛋白質が検出され、その中にはこれまでに報告されているエナメル芽細胞の分化マーカーも含まれていた。ただし、転写因子などの細胞内での発現量が少ないと思われる蛋白質については十分に検出できなかったことから、蛋白質の量や分画数を増やす等のさらなる条件検討を行ってから、エナメル芽細胞の新規分化誘導因子を検索する必要がある。

To investigate the conditions for the correct selection of new differentiation-inducing factors in embryonic cells using tissue sections. Finally, the hidden teeth are used in the predetermined manner, and the teeth are used in the predetermined manner. The frozen, unfixed and non-demineralized sections of mandible were prepared by using OCT. The effect of liquid chromatography (LC-MS/MS) on the quality of the dye solution was studied. The results of the experiment on the thickness and strength of the seed cells show that the optimal conditions for the selection of LMD cells are obtained. In addition, the preparation of LC-MS/MS analysis, the use of a large number of samples for easy collection, the presence or absence of impurities in the preparation of slices, the presence or absence of impurities in the LMD, the amount of protein required, and the detection sensitivity of protein are discussed. 5μg of protein was used in the LC-MS/MS assay. The results showed that 101 proteins were detected and reported in the differentiation of cell buds. It is necessary to explore the conditions for the development of new differentiation inducing factors in germ cells, such as increasing the amount of protein and protein in cells.