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超音波を利用したin vitroおよびin vivoでの遺伝子導入の増強

使用超声波增强体外和体内基因转移

基本信息

批准号：
04F02550
负责人：
田畑泰彦
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)非ウィルスベクターの創製遺伝子は負電荷をもつアニオン性の高分子であり、細胞表面の負電荷との斥力により、そのままでは細胞内へ導入することはほとんど不可能である。本研究では、カチオン性高分子を用いて、遺伝子とポリイオンコンプレックスを形成させることによって、全体としての電荷を正しく、遺伝子の分子サイズを低下させ、細胞への遺伝子導入率の向上を試みた。まず、細胞との親和性の高い水溶性高分子である、ゼラチンあるいは細胞接着に関係するペプチド配列をもつプロネクチンFに対して、カチオン性のエチレンジアミンあるいはスペルミンを化学導入した。得られたカチオン化水溶性高分子と遺伝子との複合体について、表面電荷や分子サイズなどの物理化学的性質を調べたところ、期待通り、分子サイズが約200nmの正に帯電したポリイオンコンプレックスが形成されていることが分かった。(2)細胞の接着環境および培養方法が遺伝子導入に与える影響細胞の接着環境を変化させるために、異なる3種類の3次元足場材料を作製した。すなわち、ポリエチレンテレフタレート(PET)繊維からなる不織布、コラーゲンスポンジ、およびポリグリコール酸(PGA)繊維を用いてコラーゲンスポンジの力学的特性を改善したPGA-コラーゲン複合スポンジである。これらの3次元足場材料へ(1)で作製したカチオン化水溶性高分子と遺伝子とのポリイオンコンプレックスを含浸させることによって、遺伝子を坦持した3次元足場材料を得た。骨髄から単離した間葉系幹細胞(MSC)をこの足場材料内で培養したところ、MSCは増殖することが分かった。次に、 MSCに遺伝子-カチオン化ゼラチンコンプレックスを与え、培養したところ、MSCへの遺伝子導入が認められた。次に、あらかじめ、コンプレックスを坦持させた、3次元足場材料へMSCを播種した。通常の静置培養に加えて、旋回培養あるいは還流培養法で細胞を培養したところ、還流培養法が、他の培養法に比べて、遺伝子導入率、発現レベルの高いことが分かった。

(1) it is not possible to inject energy into the cells in the presence of high molecular weight, the surface of the cell, the repulsion force on the cell surface, and the temperature in the cell. it is not possible to enter the cell in the cell. In this study, the use of high molecular weight, low molecular weight, high molecular weight, high molecular weight, low The water-soluble polymers of high molecular weight, high molecular weight, high The complex of water-soluble polymers, the surface charge molecules, the physical and chemical properties, the expected molecular weight, the 200nm concentration, the molecular charge, the physical and chemical properties, the molecular charge, the physical and chemical properties of the water-soluble high molecular weight, the molecular charge, the physical and chemical properties of the water-soluble polymer were obtained. (2) the method of environmental training is used to improve the environment, and then the environment is changed, and the third-order metapod materials such as environmental protection and environmental protection are used. The mechanical properties of the machine are improved in terms of the mechanical properties of the machine, such as the improvement of the mechanics, the improvement of the mechanical properties, the improvement of the properties of the mechanics, and the improvement of the mechanical properties of the machine. (PET), the mechanical properties are improved. The three-dimensional field material (1) is used to convert the water-soluble polymer into the water-soluble polymer. The bone tissue was isolated from the MSC, and the materials in the field were cultured and MSC were collected. In the second place, MSC won't let you know if you don't know what to do. In the second, second, second and third times, the materials of MSC are used to sow materials. Usually, the static culture method, the cyclic culture method, the flow culture method, the cell culture method, the flow culture method, the cell culture method, the flow culture method, the cell culture method, the flow culture method, the cell culture method, the flow culture method, the cell culture method, the flow culture method, the cell culture method, the flow culture method, the cell culture method, the flow culture method, the cell culture method, the flow culture method, the cell culture method, the flow culture method, the cell culture method, the flow culture method, the cell culture method, the flow culture method, the cell culture method, the flow culture method, the cell culture method, the flow culture method, the cell culture method, the flow culture method, the cell culture method, the flow culture method, the cell culture method, the flow culture method, the cell culture method, the flow culture method, the cell culture method, the flow culture method, the cell culture