超音波を利用したin vitroおよびin vivoでの遺伝子導入の増強

使用超声波增强体外和体内基因转移

• 批准号: 04F02550
• 负责人: 田畑 泰彦
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04F02550/
• 关键词: 遺伝子導入; 非ウィルス性遺伝子キャリア; ポリイオンコンプレックス; 3次元足場材料; カチオン性水溶性高分子; 細胞培養法

(1)非ウィルスベクターの創製遺伝子は負電荷をもつアニオン性の高分子であり、細胞表面の負電荷との斥力により、そのままでは細胞内へ導入することはほとんど不可能である。本研究では、カチオン性高分子を用いて、遺伝子とポリイオンコンプレックスを形成させることによって、全体としての電荷を正しく、遺伝子の分子サイズを低下させ、細胞への遺伝子導入率の向上を試みた。まず、細胞との親和性の高い水溶性高分子である、ゼラチンあるいは細胞接着に関係するペプチド配列をもつプロネクチンFに対して、カチオン性のエチレンジアミンあるいはスペルミンを化学導入した。得られたカチオン化水溶性高分子と遺伝子との複合体について、表面電荷や分子サイズなどの物理化学的性質を調べたところ、期待通り、分子サイズが約200nmの正に帯電したポリイオンコンプレックスが形成されていることが分かった。(2)細胞の接着環境および培養方法が遺伝子導入に与える影響細胞の接着環境を変化させるために、異なる3種類の3次元足場材料を作製した。すなわち、ポリエチレンテレフタレート(PET)繊維からなる不織布、コラーゲンスポンジ、およびポリグリコール酸(PGA)繊維を用いてコラーゲンスポンジの力学的特性を改善したPGA-コラーゲン複合スポンジである。これらの3次元足場材料へ(1)で作製したカチオン化水溶性高分子と遺伝子とのポリイオンコンプレックスを含浸させることによって、遺伝子を坦持した3次元足場材料を得た。骨髄から単離した間葉系幹細胞(MSC)をこの足場材料内で培養したところ、MSCは増殖することが分かった。次に、 MSCに遺伝子-カチオン化ゼラチンコンプレックスを与え、培養したところ、MSCへの遺伝子導入が認められた。次に、あらかじめ、コンプレックスを坦持させた、3次元足場材料へMSCを播種した。通常の静置培養に加えて、旋回培養あるいは還流培養法で細胞を培養したところ、還流培養法が、他の培養法に比べて、遺伝子導入率、発現レベルの高いことが分かった。

(1) the ウ ィ ル ス ベ ク タ ー の created legacy 伝 son は negative を も つ ア ニ オ ン sex の polymer で あ の り, cell surface negative charge と の repulsion に よ り, そ の ま ま で は intracellular へ import す る こ と は ほ と ん ど impossible で あ る. This study で は, カ チ オ ン high molecular を with い て, but 伝 と ポ リ イ オ ン コ ン プ レ ッ ク ス を form さ せ る こ と に よ っ て, all と し て の is charge を し く, but 伝 の molecular サ イ ズ を low さ せ, cell へ の heritage 伝 son の import rate upward を try み た. High い ま ず, cell と の affinity の water-soluble polymer で あ る, ゼ ラ チ ン あ る い は cells then に masato is す る ペ プ チ ド match column を も つ プ ロ ネ ク チ ン F に し seaborne て, カ チ オ ン sex の エ チ レ ン ジ ア ミ ン あ る い は ス ペ ル ミ ン を chemical import し た. Have ら れ た カ チ オ ン chemical traces of water soluble polymer と 伝 son と の complex に つ い て, surface charge や molecular サ イ ズ な ど の physical and chemical properties of を adjustable べ た と こ ろ, expect り, molecular サ イ ズ が about 200 nm の is に 帯 electric し た ポ リ イ オ ン コ ン プ レ ッ ク ス が form さ れ て い る こ と が points か っ た. (2) cells の then environment お よ び training methods が heritage 伝 import に and え る affect cell の を then environment - the さ せ る た め に, different な る 3 kinds の 3 dimensional system of full field materials を し た. す な わ ち, ポ リ エ チ レ ン テ レ フ タ レ ー ト (PET) 繊 d か ら な る nonwoven fabric, コ ラ ー ゲ ン ス ポ ン ジ, お よ び ポ リ グ リ コ ー ル acid (PGA) 繊 d を い て コ ラ ー ゲ ン ス ポ ン ジ の mechanics features を improve し た PGA - コ ラ ー ゲ ン composite ス ポ ン ジ で あ る. こ れ ら の へ foot three dimensional field materials (1) で cropping し た カ チ オ ン the water-soluble polymer と posthumous son 伝 と の ポ リ イ オ ン コ ン プ レ ッ ク ス を containing leaching さ せ る こ と に よ っ て, but 伝 を temple holds し た foot three dimensional field material を た. Bone marrow か ら 単 from し among た leaf stem cells (MSC) を こ の foot field within the material で cultivate し た と こ ろ, MSC は raised colonization す る こ と が points か っ た. に, MSC に heritage 伝 sub - カ チ オ ン change ゼ ラ チ ン コ ン プ レ ッ ク ス を and え, cultivating し た と こ ろ, MSC へ の heritage 伝 son import が recognize め ら れ た. に, あ ら か じ め, コ ン プ レ ッ ク ス を temple holds さ せ た foot, 3 dimensional field material へ MSC を seeding し た. Usually の stand for cultivating に plus え て, cycle training あ る い は also flow cultivation method で cells を し た と こ ろ, also flow method of cultivation method が, he の に than べ て, heritage 伝 import rate, 発 now レ ベ ル の high い こ と が points か っ た.

项目成果

PEGylation enhances tumor targeting of plasmid DNA by an artificial cationized protein with repeated RGD sequences, Pronectin.

聚乙二醇化可通过具有重复 RGD 序列的人工阳离子化蛋白 Pronectin 增强质粒 DNA 的肿瘤靶向性。

• 发表时间: 2004
• 期刊: J.Control.Release. 97(1)
• 作者: Hosseinkhani;H.;Tabata;Y.
• 通讯作者: Y.