トリテルペンサポニンの生合成工学

三萜皂苷生物合成工程

• 批准号: 04F04114
• 负责人: 海老塚 豊
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04F04114/
• 关键词: トリテルペン; サポニン; 生合成工学; オタネニンジン; シロイヌナズナ; トリテルペン水酸化酵素; オキシドスクアレン閉環酵素; ジンセノサイド; トリテルペン合成酵素; トリテルペンサポニン; 正合成工学; 遺伝子クローニング

トリテルペンサポニンの生合成工学を目的に、その生合成酵素のクローニングを行った。当該期間においては、トリテルペンサポニンの中でも医薬品として有用性の高いオタネニンジン(Panaxginseng)が生産するジンセノサイドを対象とし、生合成における第二段階である水酸化反応を司るトリテルペン水酸化酵素のクローニングを試みた。本酵素はシトクロームP450型の酵素と考えられている。そこで、シトクロームP450型の酵素という情報を利用してクローニングを行った。ESTのデータベースにオタネニンジン由来シトクロームP450が一例報告されており、そのものをPCRで増幅した。また、同時に、シトクロームP450の保存配列を利用して、オタネニンジンで発現しているシトクロームP450を2種得た。得られた全長クローンを酵母で発現させ、β-アミリン、及び、ダンマレンジオールを基質として反応させ、生成物を調べたが、予想される生成物の確認はできなかった。また、水酸化酵素のクローニングと併せて、モデル植物であるシロイヌナズナ(Arabidopsis thaliana)のオキシドスクアレン合成酵素の機能解析を行った。ゲノム配列が報告されている4種のオキシドスクアレン合成酵素のホモログのcDNAをPCRで増幅し、ラノステロール合成酵素欠損酵母で発現させ生成物を単離し、NMR、及びMSなどのスペクトル解析により生成物の構造を決定した。その結果、それら4種のホモログはラノステロール合成酵素、マラバリカジエンジオール合成酵素、バルオール合成酵素、セコトリテルペン合成酵素であることが判明した。

トリテルペンサポニンの生综合工程をpurposeに, その生SYNTHETIC ENzyme のクローニングを行った. During this period, the production of Panaxginseng, Panaxginseng, and Panaxginseng are of high usefulness The second stage of the water Acidification reaction enzyme water acidification enzyme のクローニングをtestみた. This enzyme is a P450 type enzyme.そこで、シトクロームP450 type enzyme というinformationをutilizationしてクローニングを行った. ESTのデータベースにオタネニンジンoriginシトクロームP 450がOne case reportされており、そのものをPCRでincreased widthした.また、simultaneous useして、オタネニンジンで発appears しているシトクロームP450を2 kinds are obtained. Get the full length of られたクローンをyeast で発appearさせ、β-アミリン、和び、ダンマレンジオールをSubstrate としてReflection させ, Product を Adjustment べたが, I want されるProduct のConfirmation はできなかった. Arabidopsis thaliana) functional analysis of the enzyme's function.ゲノムmatch report されている4 kinds of のオキシドスクアレン synthesis Enzyme cDNA PCR amplification Synthetic enzyme-deficient yeast can be used to determine the structure of the product by analyzing the structure of the product using NMR and MS analysis.そのRESULT, それら4 kinds of のホモログはラノステロール synthetic enzyme, マラバリカジエンジオールsynthetic enzyme, バルオールsynthetic enzyme, セコトリテルペンsynthetic enzyme であることが clarified.

项目成果

Synthesis of Digalactosyl Diacylglycerols and their Structure Inhibitory Activity on Human Lanosterol Synthase

双半乳糖二酰基甘油的合成及其结构对人羊毛甾醇合酶的抑制活性

• 发表时间: 2005
• 期刊: Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 15(1)
• 作者: Masaaki Shibuya;Rie Tanaka;Masaaki Shibuya;Rie Tanaka
• 通讯作者: Rie Tanaka

ラノステロール合成酵素

羊毛甾醇合酶

• 发表时间: 2005

Revised Structures of Epohelmins A and B Isolated as Lanosterol Synthase Inhibitors from a Fungal Strain FKI-0929

• DOI: 10.1038/ja.2005.82
• 发表时间: 2005-09
• 期刊: The Journal of Antibiotics
• 作者: M. Shibuya;B. Snider;Y. Sakano;H. Tomoda;S. Ōmura;Y. Ebizuka

Identification of β-Amyrin and Sophoradiol 24-Hydroxylase by EST Mining and Functional Expression Assay

EST挖掘和功能表达分析鉴定β-香树脂醇和槐二醇24-羟化酶

• 发表时间: 2006
• 期刊: FEBS Journal 273(5)
• 作者: Masaaki Shibuya

Constituents of Laurus nobilis L. Inhibit Recombinant Human Lanosterol Synthase

月桂成分抑制重组人羊毛甾醇合酶

• 发表时间: 2006
• 期刊: J. Nat. Med. 60(1)
• 作者: Masaaki Shibuya;Rie Tanaka
• 通讯作者: Rie Tanaka