ヒトヘルペスウイルス8(HHV-8)の病態と遺伝子発現

人类疱疹病毒 8 型 (HHV-8) 的病理学和基因表达

• 批准号: 00J01959
• 负责人: 西村 健
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J01959/
• 关键词: HHV-8; 初期遺伝子; 転写後調節; PCBP1; IRES

HHV-8は、カポジ肉腫組織から遺伝子断片がクローニングされたガンマヘルペスウイルス亜科に属するウイルスである。HHV-8のORF57遺伝子は潜伏感染から再活性化する際に初期遺伝子として発現する遺伝子であり、単純ヘルペスウイルスのICP27遺伝子と相同性があることから、転写後調節因子として他の遺伝子の発現調節に働くことが予想されているが、その詳細は明らかになっていない。そこでHHV-8 ORF57遺伝子の機能解析を行うために、ORF57にコードされているタンパク質に対する抗体を作成し、感染細胞内でのORF57の発現動態を確認するとともに、yeast two-hybrid法を用いてORF57タンパク質と細胞内で相互作用するタンパク質のクローニングを試みた。作成したORF57に対する抗体を用いて、HHV-8が潜伏感染したBC3細胞内でのORF57タンパク質の発現を調べた結果、潜伏感染状態ではほとんど発現が確認されていないのに対し、TPAで再活性化を誘導した24時間後には5割以上の細胞で発現が確認された。このことから、ORF57は再活性化によって発現が強く誘導されてくる遺伝子であるということが明らかになった。次に、yeast two-hybrid法を用いてORF57タンパク質と細胞内で相互作用するタンパク質のクローニングを試みた結果、11個の陽性クローンが得られた。その中で、細胞の持つ転写後調節因子であるpoly(rC)-binding protein (PCBP1)が、実際にORF57タンパク質と直接もしくは間接的に結合するということを、GST pull down法を用いて明らかにした。PCBP1はinternal robosome-entry site (IRES)依存的な翻訳調節に関係することが明らかになっていることから、この発現調節にORF57が関与するかを調べた結果、ORF57はPCBP1によるIRES依存的翻訳活性化をさらに増強する機能を持つことが明らかになった。以上の結果から、ORF57はウイルスの再活性化の際に発現が誘導された後、PCBP1と相互作用することによって、IRES依存的な翻訳調節を介して、転写後調節因子として様々な遺伝子の発現を調節しているということが明らかになった。

HHV-8是一种属于亚家族γ瘤病毒的病毒，其中基因片段是从卡波西肉瘤组织克隆的。 HHV-8的ORF57基因是一种基因，当从潜在感染中重新激活时，它表示为早期基因，并且与疱疹单纯疱疹病毒的ICP27基因均匀，因此预计它将在其他基因的调节中充当转录后调节剂，但尚未揭示出细节。因此，为了分析HHV-8 ORF57基因的功能分析，确认了对受感染细胞中ORF57编码的蛋白质的抗体，并确认了ORF57的表达动力学，并使用使用YEAST两种方法进行了与细胞中ORF57蛋白相互作用的蛋白质的克隆。使用针对ORF57产生的抗体，我们研究了BC3细胞中ORF57蛋白的表达，该细胞受HHV-8的潜在感染。相比之下，TPA诱导重新激活后24小时在超过50％的细胞中证实了表达。这表明ORF57是一个基因，其表达是通过重新激活强烈诱导的。接下来，使用酵母两杂化方法在细胞内与ORF57蛋白相互作用的蛋白质克隆导致11个阳性克隆。在这项研究中，使用GST下拉方法揭示了poly（RC）结合蛋白（PCBP1）是一种后期调节因子，实际上直接或间接与ORF57蛋白结合。 PCBP1已被证明参与了内部机器人进入位点（IRES）依赖性翻译调节，并且由于检查了ORF57是否参与了该表达调控，因此揭示ORF57具有进一步增强PCBP1的IRES依赖性翻译激活的功能。以上结果表明，ORF57通过IRES依赖性的翻译调节来调节各种基因作为转录后调节剂的表达，通过与PCBP1相互作用在病毒重新激活期间诱导表达后的表达。