核小体における0bgEホモログの機能役割

0bgE 同源物在核仁中的功能作用

• 批准号: 04J01300
• 负责人: 佐藤 綾
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J01300/
• 关键词: Obgタンパク質; GTPase; リボソーム; 核小体; ミトコンドリア; 真核生物; Obg; rRNA; 分子進化; リボソーマルタンパク質; 大腸菌; Hela細胞; 細胞周期

我々は、大腸菌におけるObgホモログObgEの機能を明らかにした後、ヒトにおけるObgタンパク質ObgH1,ObgH2を同定し、その機能解析までを行った。大腸菌では、細胞分画法と、プルダウンアッセイよりObgEがリボソーム30S,50Sフラクションと相互作用することを明らかにし、また、obgE温度感受性変異株の解析よりObgEがリボソームの成熟に必須であることを明らかにした。その後、ヒトにおけるObgホモログを同定しこれをObgH1,ObgH2としてHeLa細胞を用いて機能解析を行った。始めに、ヒトObgH1,ObgH2をそれぞれ、obgE温度感受性変異株において強制発現させると、各々にこの成長阻害を補完した。また、ObgH1,ObgH2を精製しGTPase活性を測定するとkcatは各々0.014±0.005,0.010±0.002min-1であり、これはこれまでObgEで報告されているkcat 0.017min-1と類似している。次にHeLa細胞においてRNAiを行いObgH1をノックダウンすると、ミトコンドリアの異常伸長及び、核の形態異常が引き起こされた。ObgH2のRNAiでは、核小体のsub compartmentの崩壊が観察されたことから、ObgH2は核小体構造維持に必須であることがわかった。免疫染色を行うと、ObgH1はミトコンドリアに局在し、ObgH2は核小体のDFCと呼ばれる繊維状部へ局在を示したほか、細胞分裂期においては、染色体の表面全体に分布するように見られた。これは典型的な分裂期における核小体タンパク質の分布である。バクテリアでは、一種類のみのObgが保存されているのに対して、動物や植物では複数のObgホモログが存在する。我々は、Obgタンパク質の系統樹解析を行い、ObgH2が動物進化後に得たホモログであるというモデルを提示した。

I々は、Eliform bacteriaにおけるObgホモログObgEのfunctionを明らかにした后、ヒトにおObgH1,ObgH2, and function analysis Escherichia coli, cell separation method, プルダウンアッセイよりObgE がリボソーム 30S, 50S フラクションとinteraction することを明らかにし、また、obgE temperature sensitivity剉different strainのanalytic よりObgEがリボソームの成に必であることを明らかにした.その后、ヒトにおけるObgホモログを同定しこれをObgH1,ObgH2としてHeLa cells are analyzed by いて function. Haikou, ObgH1, ObgH2, and obgE are different strains of ObgE and are temperature-sensitive.また、ObgH1、ObgH2をRefined GTPase activityをMeasurementするとkcatはeach々0.014±0. 005,0.010±0.002min-1であり、これはこれまでObgEでreportされているkcat 0.017min-1 is similar to している. HeLa cell RNAi line ObgH1 Abnormal elongation of ると, ミトコンドリアの and abnormal morphology of び, nucleus がきこされた. ObgH2's RNAi is good, nucleosome's sub compartment is broken down, and nucleosome's structure is maintained. Immunostaining: を行うと, ObgH1 はミトコンドリアにbureau in し, ObgH2 はnucleosome のDFC とcall ばれるThe shape of the dimensional part is shown in the figure, the cell division phase is indicated, and the overall surface distribution of the chromosome is shown in the figure. Typical distribution of nucleosomes during the cleavage period.バクテリアでは, a kind of のみのObgがpreservationされているのに対して, animalやplantではpluralのObgホモログがexistentする. I am 々は, Obgタンパクquality phylogenetic tree analysis を行い, ObgH2がanimal evolution に got たホモログであるというモデルをhint した.

项目成果

The GTP binding protein Obg homologue ObgE is involved in ribosome maturation.

GTP 结合蛋白 Obg 同源物 ObgE 参与核糖体成熟。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Genes to Cells 10
• 作者: Yokozeki;T.;et al.;Aya Sato
• 通讯作者: Aya Sato