トランスジェニックマウスを用いたピロリ菌感染における胃腺粘液細胞型粘液の機能解明

使用转基因小鼠阐明胃腺粘液细胞型粘液在幽门螺杆菌感染中的功能

• 批准号: 04J06015
• 负责人: 伊藤 有紀
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J06015/
• 关键词: セミノックインマウス; トランスジェニックマウス; O-グリカン; 糖鎖遺伝子; ピロリ菌; ノックアウトマウス; 糖転移酵素

本研究の目的は、胃粘膜表層部の表層粘液細胞で特異的にヒトα4gnt遺伝子を発現させたトランスジェニックマウス(Tgマウス)を作出することにより、ピロリ菌感染におけるαGlcNAc含有びグリカンの機能を個体レベルで明らかにすることである。平成18年度は、受精卵への追加マイクロインジェクションを経て、サザン選抜の結果3-100コピーの遺伝子断片が挿入されたFOマウス5頭より、F1マウスの繁殖ならびにライン選抜を行った。F1マウスの胃および肝臓を採取し、ヒトα4GnT抗体ならびにHIK1083抗体で免疫染色を行ったところ、ヒトα4GnTの発現は確認されなかった。またRT-PCRでもヒトα4GnT遺伝子は検出できなかった。ヒトα4GnT遺伝子が発現していない可能性としては、導入遺伝子断片がサプレッサー付近に導入されることにより発現が妨げられた可能性、構築した導入遺伝子断片のプロモーターが作用しなかった可能性が挙げられる。よって、Tgマウスの作製方法を再考した。(株)ワイエス研究所殿(現・(株)フェニックスバイオ)との共同研究により、セミノックインマウスの作出に着手した。セミノックインストラテジーは、発現制御の忠実性を解決するために、BACクローンを直接組み換えてTgマウスを作出する方法である。胃の表層粘膜部に発現していることが明らかになっているMUC5ACの5'プロモーターの下流にヒトα4GnT遺伝子を挿入したグノムクローンを構築した。マイクロインジェクション、FOマウスのサザン選抜の結果、1コピー、3コピーのTgマウスをそれぞれ3頭、1頭を得た。現在、F1マウスの繁殖を行っている。今後、ライン選抜の結果、表層粘膜部でヒトα4GnTのmRNAならびにタンパク質の発現が確認されたTgマウスを得ることができれば、SS1株を用いたピロリ菌感染実験を予定している。

The purpose of this study was to develop specific α4gnt gene expression in gastric mucosal surface cells and to develop a specific α 4gnt gene expression in gastric mucosal surface cells. In 2018, the fertilized egg was added to the egg, and the result of the selection was 3-100 °. The egg fragment was inserted into the FO, and the F1 egg was selected. The presence of α 4GnT was confirmed by immunostaining with HIK1083 antibody. RT-PCR is the first to detect the presence of α4GnT. The probability of discovery of α4GnT gene fragments and the probability of occurrence of α 4GnT gene fragments. A re-examination of the manufacturing method of the resin and Tg. (Co., Ltd.) The method for solving the problem of reliability and reliability of BAC system is to directly compose Tg system. The surface mucosa of the stomach was found in the middle of the stomach, and the MUC5AC was constructed in the lower part of the stomach. 1 ° C, 3 ° C, 3 ° C, 1 ° C Now, F1, it's breeding. In the future, as a result of gene selection, the expression of α4GnT mRNA in the surface mucosa was confirmed, and the expression of SS1 strain was determined.

项目成果

Assay of human gastric mucin as a natural antibiotics against Helicobacter pylori

人胃粘蛋白作为天然抗生素对抗幽门螺杆菌的测定

• 发表时间: 2006
• 期刊: Methods in Enzymology 415・C
• 作者: Fukuda;et al.
• 通讯作者: et al.

The rice nuclear genome continuously integrates, shuffles, and eliminates the chloroplast genome to cause chloroplast-nuclear DNA flux

• DOI: 10.1105/tpc.104.027706
• 发表时间: 2005-03-01
• 期刊: PLANT CELL
• 影响因子: 11.6
• 作者: Matsuo, M;Ito, Y;Obokata, J
• 通讯作者: Obokata, J