权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

耐塩性乳酸菌分子シャペロンの機能発現によるスーパーストレス耐性生物の分子育種

耐盐乳酸菌分子伴侣功能表达超耐逆生物分子育种

基本信息

批准号：
04J06799
负责人：
杉本真也
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

耐塩性乳酸菌Tetragenococccus halophilus由来の種々の分子シャペロンの構造および機能の詳細を明らかにした。T.halophilus ClpB (ThaClpB)に関しては、精製タンパク質を用いた生化学的解析結果より、ThaClpBの4次構造が熱や塩などの環境ストレス、あるいはATPの結合により変化し、それに伴い機能が変化することを明らかにした(J.Bacteriol.2006)。次に、T.halophilus DnaK (ThaDnaK)と大腸菌由来DnaKの機能を比較しながら、ThaDnaKの分子機構を明らかにした。一般的にDnaKはコシャペロンDnaJ、GrpEによりATP加水分解サイクルが活性化され、それに伴う構造変化により基質タンパク質との結合・解離を繰り返し、効率よく基質タンパク質のフォールディングを行う。しかし、精製タンパク質を用いたATPase活性測定、変性タンパク質リフォールディング活性測定および表面プラズモン共鳴バイオセンサーによる相互作用解析の結果から、ThaDnaKは大腸菌とは異なりDnaJおよびGrpEと協調的に機能しないことが示唆された。このような特性は他の乳酸菌にも見られ、大腸菌などに比べて乳酸菌のシャペロン機能は弱いことが示唆された(J.Bacteriol.へ投稿中)。さらに、大腸菌などのグラム陰性細菌にはT.halophilusやその他グラム陽性細菌にはない23アミノ酸残基の挿入配列がDnaKのATPaseドメインに存在し、その部位がDnaJおよびGrpEと協調的に機能する上で重要であることを示した(FEBS Lett.へ投稿中)。上記の成果より、乳酸菌の分子シャペロンシステムをより強力・高効率なものへと改変することで、高いストレス耐性能を有する有用乳酸菌の分子育種が可能であると考えられた。そこで、乳酸発酵、バクテリオシン生産などにおいて使用されてきた乳酸菌Lactococcus lacis subsp.lactisをモデルとし、分子シャペロンの機能強化によるストレス耐性能の向上を目指した。ThaDnaK発現株と大腸菌DnaK発現株についてはすでに構築済みであり、現在DnaK以外の分子シャペロン発現株および複数の分子シャペロン共発現株を構築している。これら分子シャペロン機能強化株のストレス耐性能および発酵生産性の向上が期待される。

There are several kinds of molecular markers of resistant lactic acid bacteria (Tetragenococccus halophilus). They can be used in the production of Lactobacillus. T.halophilus ClpB (ThaClpB) was used to analyze the analytical results of biochemistry, ThaClpB was used to analyze the results of environmental chemistry, ATP was used in combination with chemical chemistry, and the machine was used to improve the performance of chemical analysis (J.Bacteriol.2006). Secondary and T.halophilus DnaK (ThaDnaK) pathogens come from the DnaK machine and the molecular mechanism of ThaDnaK. In general, DnaK is sensitive to DnaJ, GrpE, ATP, water decomposition, activation, and so on. This is a combination of dissociation and dissociation. The results of interaction analysis, the results of the analysis of the interaction between bacteria and bacteria, the detection of the activity of ATPase, the determination of the activity of DNA, the determination of the activity of GrpE, the determination of the activity of GrpE, the analysis of the interaction, the results of the analysis of interaction The characteristics of lactic acid bacteria were lower than that of lactic acid bacteria (J.Bacteriol). (in the contribution). The acid residues were added to the column DnaK, ATPase, presence, DnaJ, GrpE, and FEBS Lett on the machine energy equipment (FEBS Lett. (in the contribution). In recent years, the molecular breeding of lactic acid bacteria has been tested, the molecular breeding of lactic acid bacteria has been tested, and the molecular breeding of lactic acid bacteria has been tested. Lactobacillus, lactic acid fermentation, lactic acid fermentation, lactic acid bacteria, Lactococcus lacis subsp.lactis, lactic acid bacteria, and molecular DNA were used to enhance the tolerance of bacteria. ThaDnaK strain DnaK has been isolated from E. coli, and now it has been detected by molecular markers other than DnaK. There is a total of multiple molecules. The molecular mechanism can enhance the tolerance of the strain, and the enzyme activity is expected to increase.

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Reconstitution and function of Tetragenococcus halophila chaperonin 60 tetradecamer

嗜盐四联球菌伴侣蛋白 60 四聚体的重建和功能

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Journal of Bioscience and Bioengineering 99
影响因子：
0
作者：
S.Sugimoto;H.Yoshida;Y.Mizunoe;K.Tsuruno;J.Nakayama;K.Sonomoto;Amonlaya Tosukhowong
通讯作者：
Amonlaya Tosukhowong

好塩性乳酸菌の分子シャペロン〜その応用と機能〜

嗜盐乳酸菌的分子伴侣-其应用和功能-