タンパク質フォールディングに対する天然状態類似相互作用の役割のNMRによる研究

核磁共振研究天然态相互作用对蛋白质折叠的作用

• 批准号: 13780529
• 负责人: 水口 峰之
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780529/
• 关键词: タンパク質; フォールディング; モルテングロビュール; NMR; モルテングロビュール状態

(目的)本研究の目的は、タンパク質フォールディングにおける部分的天然構造の役割を理解することである。そのために、α-ラクトアルブミンのD-ヘリックスをウマリゾチームのD-ヘリックスのアミノ酸配列に置換したキメラ蛋白質を作製し、モルテングロビュール状態での非天然構造を天然構造へと変化させる。重水素交換ラベル法と2次元NMR法を組み合わせた方法を用いることによって、キメラ蛋白質のフォールディング反応を残基レベルで追跡し、モルテングロビュール状態の部分的天然構造がタンパク質フォールディングにどのような影響を与えるのか調べる。さらにNMRを用いてキメラ蛋白質の運動性解析や立体構造解析を行い、ヘリックス置換の影響について調べる。(結果)マニュアルミキシングによる重水素交換ラベルを行うには、タンパク質フォールディングが十分遅い反応である必要がある。まずはキメラタンパク質のフォールディング反応を遅くすることを試みた。アルコールなどの有機溶媒や様々な塩を加えることによってフォールディング反応がどのように変化するのか調べたが、変性する速度に著しい違いが現れる条件をいくつか見つけるにとどまった。巻き戻り速度(リフォールディング速度)については、マニュアルミキシングを可能にするほど反応を遅くすることができなかった。15Nで安定同位体標識したキメラタンパク質を用いてT1,T2,NOE測定を行い、モデルフリー解析を行うことによって主鎖の運動性を解析した。その結果、キメラタンパク質のD-ヘリックスの運動性は著しく制限されており、ピコ秒〜ナノ秒の運動、マイクロ秒〜ピコ秒の運動性が共に低いことを明らかとした。運動性やフォールディング反応と立体構造との関連を調べるためにキメラタンパク質のNMRデータから立体構造を決定しようと試みた。現在NOEピークの帰属中であり、また、変異を導入したD-ヘリックス近傍では、野生型と比較してNOEのパターンが異なることを見出した。

The purpose of this study is to understand some natural structures. The D-list of all kinds of proteins in the α-list of all kinds of proteins in the list of proteins in the list of all kinds of proteins in the list of The method of heavy water element exchange and 2D NMR was used to combine the methods of protein and protein residues. The natural structure of some parts of the state of protein was traced and analyzed. NMR is used to analyze the kinetic properties of proteins, the spatial structure of proteins, and the effects of substitution. (Results) The results of the study showed that there was a need for more information on the exchange of heavy metals. The best way to do this is to try to get rid of it. The organic solvent is mixed and mixed. The organic solvent is mixed and mixed. The organic solvent is mixed and mixed. The speed of the car is high, and the speed of the car is high. 15N stable isotope identification, identification. As a result, the quality of the D-game is limited to the movement of the game, the game is limited to the movement of the game, the game is limited to the movement of the game, and the game is limited to the movement of the game. Kinematic analysis of NMR spectra and their relationship with each other Now NOE is in the middle of the genus, and different from the wild type.

项目成果

Mizuguchi, M., Kobashigawa, Y., Kumaki, Y., et al.: "Effects of a helix substitution on the folding mechanism of bovine α-lactalbumin"Proteins. 49. 95-103 (2002)

Mizuguchi，M.，Kobashikawa，Y.，Kumaki，Y.，等人：“螺旋取代对牛α-乳清蛋白折叠机制的影响”蛋白质49. 95-103 (2002)。

Miura, K., Kamimura, M., Mizuguchi, M., et al.: "Solution structure of paralytic peptide of silkworm, Bombyx mori"Peptide. 23. 2111-2116 (2002)

Miura, K.、Kamimura, M.、Mizuguchi, M.等人：“家蚕麻痹肽的溶液结构”肽。

Matsubara, K., mizuguchi, M., kawano, K.: "Expression of a synthetic gene encoding human transthyretin in Escherichia coli"Protein Expression and Purification. (in press). (2003)

Matsubara, K.、mizuguchi, M.、kawano, K.：“编码人转甲状腺素蛋白的合成基因在大肠杆菌中的表达”蛋白质表达和纯化。

Tada, M., Kobashigawaga, Y., Mizuguchi, M., et al.: "Stabilization of protein by replacement of a fluctuating loop"Biochemistry. 41. 13807-13813 (2002)

Tada, M.、Kobashikawaga, Y.、Mizuguchi, M. 等人：“通过替换波动环来稳定蛋白质”生物化学。

Tada, M., Aizawa, T., Mizuguchi, M., et al.: "Role of aromatic residues in the structure and biological activity of the small cytokine, growth-blocking peptide (GBP)"Journal of Biological Chemistry. (in press). (2003)

Tada, M.、Aizawa, T.、Mizuguchi, M.等人：“芳香族残基在小细胞因子生长阻断肽（GBP）的结构和生物活性中的作用”生物化学杂志。