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ヒト嗅神経前駆細胞を用いた神経機能解析および中枢神経再生の検討

利用人嗅神经祖细胞进行神经功能分析和中枢神经再生

基本信息

批准号：
17659536
负责人：
風間恭輔
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Department of Clinical Research, National Hospital Organization Nagasaki Medical Center
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659536/
关键词：
再生医学神経新生神経幹細胞嗅上皮球形細胞

项目摘要

(1)動物嗅上皮から嗅神経前駆細胞(球形基底細胞:GBC)の単離と多能性神経幹細胞への脱分化の検討研究分担者らはこれまで、マウス嗅上皮組織から特異的抗体を用いた免疫染色法によってGBCマーカーのGBC-2を発現するGBCを同定し、さらに、嗅上皮の組織片培養を行うことにより、様々な細胞は混在するもののGBCの培養に成功した。そのうえで、GBCを単離し、神経幹細胞への脱分化の検討を行った。マウス嗅上皮を採取し、各種酵素処理によって単一細胞レベルまで分散させ培養する際、EGF、bFGF、LIFなど各種因子の添加について、また、血清条件など培養条件について、よりGBCの存在率が高くなり、さらに、より未分化な神経幹細胞の性質を有するようになる培養条件を検討した。また、嗅上皮を採取する前処理として、硫酸亜鉛処理することでGBCの回収率を上げることができた。しかし、現在のところ最適条件を見出すには至っていない。今後継続しこの細胞を用いて、脱分化の方法の確立を検討したい。(2)ヒト嗅上皮からのGBC単離と多能性神経幹細胞への脱分化の検討また、ヒト嗅上皮についても、免疫組織学的にGBCの存在場所の特定や、分離培養についても検討を行い、これまでにヒト嗅上皮については、免疫組織化学的に増殖細胞の特定を試みた結果、嗅上皮基底層に増殖細胞(Ki67陽性細胞)を確認することができ、ヒト嗅上皮においてGBCの存在場所を特定することができた。しかし、GBCの単離までには至らなかった。最近の知見より、体細胞の脱分化は今回行ってきた液性因子のみの操作では難しい例が多く、幹細胞やがん細胞に特異的に発現している遺伝子導入することで幹細胞様細胞を誘導することも報告されていることから、今後はこのような遺伝子操作技術も組み込んだ脱分化の検討を継続したい。

(1)The study of isolation and dedifferentiation of pluripotent neural stem cells from olfactory epithelial cells (spherical basal cells:GBC) in animals was carried out successfully in culture of GBC by immunostaining with antibodies specific to olfactory epithelial tissue. The study of dedifferentiation of neural stem cells The culture conditions for the selection of olfactory epithelial cells, the treatment of various enzymes, the addition of various factors such as EGF, bFGF and LIF, the culture conditions, the existence of GBC, the nature of undifferentiated neural stem cells, and the culture conditions were discussed. The recovery rate of GBC was improved by pretreatment and lead sulfate treatment. The optimal conditions for the current situation are as follows: In the future, the establishment of methods for the use and dedifferentiation of these cells will be discussed. (2)Study on dedifferentiation of GBC cells isolated from olfactory epithelium, study on differentiation of GBC cells isolated from olfactory epithelium, study on specific site of GBC by immunohistochemistry, study on isolation and culture of GBC cells isolated from olfactory epithelium, study on specific site of proliferation cells by immunohistochemistry, results of proliferation cells in basal layer of olfactory epithelium (Ki67 positive cells) were identified in the olfactory epithelium and identified in the presence of GBC. GBC's first and last name is GBC. Recent findings indicate that somatic cell dedifferentiation is now difficult to manipulate with a variety of cytokines, such as stem cell and cell-specific development, and gene introduction into stem cell induction.