魚類の免疫機構に関与するサイトカイン、特にTNFおよびFasリガンドの機能解析

鱼类免疫系统相关细胞因子的功能分析，特别是TNF和Fas配体

• 批准号: 04J12153
• 负责人: 黒部 智史
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tokyo University of Marine Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J12153/
• 关键词: ヒラメ; サイトカイン; TNF; Fasリガンド; アポトーシス; カスパーゼ; 自然免疫; 腫瘍壊死因子; 遺伝子; マイクロアレイ

本年度は、TNFおよびFasの細胞内情報伝達およびアポトーシス誘導に関与するカスパーゼ10遺伝子のクローン化を行なうと共にカスパーゼ10遺伝子発現プラスミドをヒラメ培養細胞へ導入し機能解析を行なった。クローン化したヒラメカスパーゼ10のcDNAは、全長2,282bpで、495アミノ酸残基をコードしていた。ヒラメカスパーゼ10は、2か所のDeath effector domain (DED)ホモロジー領域、LargeサブユニットおよびSmallサブユニットにより構成されていた。ヒラメカスパーゼ10の推定アミノ酸配列は、ヒトカスパーゼ10と全長配列で32.6%、Smallサブユニットで59.8%の相同性を示した。カスパーゼ10遺伝子は、ヒラメの14種類の臓器(脳、眼球、頭腎、心臓、腸、肝臓、筋肉、卵巣、白血球、表皮、脾臓、胃、後腎)の内、鰓、白血球、脾臓および後腎で強い発現を示した。その他にも、頭腎、心臓、腸、表皮および胃において発現がみられた。ヒラメカスパーゼ10のcDNAを真核生物発現用ベクター(pCI-neo vector)に組込んだ。構築した発現プラスミドをトランスフェクション法によりヒラメ胚由来の培養細胞(HINAE)に導入したところ、アポトーシス誘導能が認められた。これらのことより、ヒラメのカスパーゼ10はほ乳類のものと類似のアポトーシス誘導能を有していることが示唆された。

今年，我们将Caspase 10基因克隆，该基因参与TNF和FAS中凋亡的细胞内信号传导和诱导，并将caspase 10基因表达质粒引入培养的比目细胞中以进行功能分析。克隆的植物群SPase 10的cDNA的长度为2,282 bp，编码了495个氨基酸残基。 Flora caspase 10由两个死亡效应域（DED）同源性区域，一个大亚基和一个小亚基组成。推导的植物腔酶10的氨基酸序列在全长序列中显示出与人胱天冬酶10的同源性32.6％，与小亚基的同源性为59.8％。 caspase 10基因在比目鱼（大脑，眼球，头部和肾脏，心脏，肠子，肠，肝脏，肌肉，肌肉，卵巢，白细胞，表皮，脾，胃，胃和后肾脏病学）的14个器官（大脑，眼球，头部和肾脏，心脏，肠子，肝脏，肌肉，肌肉，肌肉，卵巢）以及在Gills，Gills，liukococytes，spleennepleen和postrrer中。在头部和肾脏，心脏，肠，表皮和胃中也可以看到其他表现。将Flora caspase 10的cDNA纳入了真核表达的载体中（PCI-NEO载体）。通过转染将构造的表达质粒引入源自比目鱼胚胎的培养细胞（HINAE），并观察到其诱导凋亡的能力。这些结果表明，比目鱼caspase 10具有与哺乳动物相似的诱导凋亡能力。

项目成果

Expression profiling of immune-related genes from Japanese flounder Paralichthys olivaceus kidney cells using cDNA microarrays

• DOI: 10.1016/j.dci.2004.10.005
• 发表时间: 2005-01-01
• 期刊: DEVELOPMENTAL AND COMPARATIVE IMMUNOLOGY
• 影响因子: 2.9
• 作者: Kurobe, T;Yasuike, M;Aoki, T
• 通讯作者: Aoki, T

Expression profiling of immune-related genes from Japanese flounder Paralichthys olivaceus kidney cells using cDNA microarray.

使用 cDNA 微阵列对牙鲆牙鲆肾细胞的免疫相关基因进行表达谱分析。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Development & Comparative Immunology 29
• 作者: Kurobe T;Yasuike M;Kimura Y;Hirono I;Aoki T.
• 通讯作者: Aoki T.