水産無脊椎動物セルラーゼの酵素工学的活用に関する研究

水生无脊椎动物纤维素酶的酶工程利用研究

• 批准号: 04J54021
• 负责人: 鈴木 賢一
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J54021/
• 关键词: セルラーゼ; アワビ; ウニ; ホタテ; 酵素

水産無籍津動物のcDNAクローニング前年度までにアワビ、キタムラサキウニ、ホタテガイの水産無脊椎動物セルラーゼの精製に成功した。そこで本年度はこれらの一次構造を明らかにするためにcDNAクローニングを行った。アワビ・セルラーゼ精製したアワビ・セルラーゼをリジルエンドペプチダーゼで完全消化後、逆相HPLCでペプチド断片を分離・精製した。これらの断片のアミノ酸配列を解析することにより得られた部分アミノ酸配列情報を用いて縮重プライマーを作成した。このプライマーとアワビの肝膵臓から調製したmRNAを逆転写して得られたcDNAを用いてPCRを行った。得られた塩基配列情報をもとに特異プライマーを合成し、5'-、3'-RACEを行うことで、アワビ・セルラーゼmRNAの非翻訳領域を決定した。得られたアワビ・セルラーゼmRNAは全長1898bpで594残基のアミノ酸をコードしていた。キタムラサキウニ・セルラーゼ精製したキタムラサキウニ・セルラーゼをリジルエンドペプチダーゼで部分消化後、電気泳動でペプチド断片を分離した。これらの断片のアミノ酸配列を解析することにより得られた部分アミノ酸配列情報を用いて縮重プライマーを作成した。このプライマーとキタムラサキウニの胃から調製したmRNAを逆転写して得られたcDNAを用いてPCRを行った。得られた塩基配列情報をもとに特異プライマーを合成し、5'-、3'-RACEを行うことで、キタムラサキウニ・セルラーゼmRNAの非翻訳領域を決定した。得られたキタムラサキウニ・セルラーゼmRNAは全長1822bpで444残基のアミノ酸をコードしていた。ホタテ・セルラーゼ精製したホタテ・セルラーゼをリジルエンドペプチダーゼで部分消化後、電気泳動でペプチド断片を分離した。これらの断片のアミノ酸配列を解析することにより得られた部分アミノ酸配列情報を用いて縮重プライマーを作成した。このプライマーとホタテの胃から調製したmRNAを逆転写して得られたcDNAを用いてPCRを行った。得られた塩基配列情報をもとに特異プライマーを合成し、5'-、3'-RACEを行うことで、ホタテ・セルラーゼmRNAの非翻訳領域を解析中である。

Aquatic invertebrate cDNA library was successfully refined in the previous year. This year, the first time the structure of the company has been opened, the cDNA library will be opened. After complete digestion, reverse phase HPLC separated and purified the fragments. This is the first time that I've ever seen a person who's been in a relationship with someone else. The expression of mRNA was detected by PCR. The sequence of genes is determined by the sequence of genes in 5'-and 3'-RACE. The full length of the mRNA was 1898 bp and the residue number was 594. After partial digestion, electrophoresis and separation of the fragments, the protein was purified and purified. This is the first time that I've ever seen a person who's been in a relationship with someone else. The expression of mRNA was detected by PCR. To obtain the base sequence information, we need to determine the non-translation domain of RACE. The full length of the mRNA was 1822 bp and the residue number was 444. The first part of the article is about the separation of the protein from the protein. This is the first time that I've ever seen a person who's been in a relationship with someone else. This is the first time I've ever seen a gene that I've ever been able to modulate. To obtain the information of the base sequence, we need to analyze the non-translation domain of the 5'-and 3'-RACE.