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2光子励起ケイジド試薬を用いたグルタミン酸受容体機能分布とカルシウム動態の可視化

使用双光子激发笼式试剂可视化谷氨酸受体功能分布和钙动力学

基本信息

批准号：
15700309
负责人：
松崎政紀
金额：
$ 2.24万
依托单位：
National Institute for Physiological Sciences (2004)Okazaki National Research Institutes (2003)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでケイジドグルタミン酸を2光子励起法で活性化する手法により、海馬錐体細胞において、機能的AMPA受容体発現とスパイン形態に強い相関があることを見出してきた。そこで本研究において、可塑性に重要な役割を果たすNMDA受容体の機能と、スパイン形態との間の関係性を調べることを行った。実験方法としては、海馬錐体細胞にホールセルを行い、低親和性カルシウム指示薬と、細胞形態を同定するためのAlexa594をロードした。これはカルシウム指示薬によるカルシウム動態の影響を少なくするためである。細胞外液のマグネシウム濃度を減らした状態で、任意のスパイン部位に対して、2光子励起によってケイジドグルタミン酸を活性化した。その結果誘発される単一スパインにおけるNMDA受容体を介したカルシウム濃度上昇を、2光子励起顕微鏡を用いて、高速ラインスキャンを行ってイメージングした。Alxa594の蛍光に対するカルシウム指示薬の蛍光比によってカルシウム濃度変化を捉えた。この方法によって、一定刺激の条件でのスパイン内カルシウム濃度変化の絶対値を求めることができるようになった。カルシウム濃度上昇は、レーザー出力の2乗に比例し、あるところで飽和することから、スパイン頭部のNMDA受容体を2光子励起法によるグルタミン酸投与によって刺激できることを実証した。また1.5マイクロメートル以上離れたスパイン間では互いに刺激が干渉せず、個々のスパインだけの反応を得られることがわかった。NMDA受容体電流及びカルシウム濃度上昇は、AMPA受容体に比べ、ノイズが高いため、同一スパインにおいて3回刺激し、それを平均化することでCVの低い値を得ることができた。

The activation of AMPA receptors by 2-photon excitation is strongly correlated with the morphology of AMPA receptors in hippocampal pyramidal cells In this study, plasticity plays an important role in regulating the function and morphology of NMDA receptors. The method is to determine whether the hippocampal pyramidal cells are active, whether the low affinity cells are active, whether the cell morphology is active, whether the low affinity cells are active, whether the low affinity cells are active or not. This is the first time I've ever seen a woman. The extracellular fluid is activated by a 2-photon excitation in response to a decrease in the concentration of the protein. As a result, the concentration of NMDA receptors increased, and 2-photon excitation was used in micromirrors. Alxa594 's luminescence ratio indicates that its concentration varies. The method is based on the condition of a certain stimulus, and the concentration of the solution is changed according to the value of the solution. The increase in the concentration of NMDA in the brain and the saturation of NMDA receptors in the brain are demonstrated by the 2-photon excitation method. 1.5. The above is the first time that a person has been exposed to a stimulus. NMDA receptor currents and concentrations increase, AMPA receptor currents increase, AMPA receptor currents increase, AMPA