テロメア末端とDNA切断末端で機能する蛋白質の新しい手法による同定

使用新方法鉴定在端粒末端和 DNA 断裂末端发挥作用的蛋白质

• 批准号: 16770002
• 负责人: 上野 勝
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Hiroshima University (2005)Shizuoka University (2004)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16770002/
• 关键词: テロメア; 分裂酵母; 遺伝学; ゲノム; DNA修復; 遺伝子; Dna2

昨年度は、Dna2タンパク質がテロメア末端の部分分解に関与することを発見した(Tomita et al. 2004,Mol.Cell.Biol.,24,9557-9567.)。そこで本年度はDNA切断末端の部分分解に関与する新規タンパク質の発見を試みた。(1)Rad50のATPaseドメインやRad32のヌクレアーゼドメインのDNA修復における重要性を調べるために、Rad50S変異株とRad32D25A変異株にExo1遺伝子を破壊した2重変異株を作成し、DNA修復能を調べた。その結果、Rad50S変異株とRad50SとExo1の2重変異株はDNA感受性ではなかった。このことから、Rad50のATPaseドメインは、DNA修復には影響しないことがわかった。一方Rad32D25A変異株はDNAダメージ感受性で、しかもRad32D25AとExo1の2重変異株は、Rad32D25A変異株よりもよりよりDNAダメージ感受性になることがわかった。このことから、Rad32D25A変異株のヌクレアーゼ活性はほとんどないことと、ヌクレアーゼ活性がDNA修復に重要であることがわかった。また、Rad50のATPaseドメインやRad32のヌクレアーゼドメインのテロメア維持における重要性を調べるために、Rad50S変異株とRad32D25A変異株にRad3遺伝子を破壊した2重変異株を作成し、テロメア構造を調べた。その結果、Rad50SとRad3の2重変異株はテロメアDNAを維持できたのに対して、Rad32D25AとRad3の2重変異株はテロメアDNAを維持できなかった。このことから、Rad32D25A変異株のヌクレアーゼ活性はテロメア維持に重要であることがわかった。(2)出芽酵母のクロマチンリモデリングに関係しているアクチン関連蛋白質Arp8はDNA切断末端の部分分解に関係していることが報告されている。そこで、分裂酵母のArp8がDNA修復に関係するかどうかを調べるために、Arp8の破壊株を作成し、DNA修復能を調べた。その結果、出芽酵母と違い、分裂酵母のArp8破壊株はDNAダメージ感受性にならなかった。さらに驚くべきことに、相同組み換え修復において中心的な役割を果たしているRhp51破壊株のDNAダメージ感受性をArp8を破壊することで、部分的に抑圧した。このことはArp8がDNA修復の制御において、重要な役割を果たしていることを示唆している。

The results of this study were summarized in Tomita et al. 2004, Mol. Cell. Biol., 24,9557-9567.)。This year, we will try to find out the new rules related to the partial decomposition of DNA cut ends. (1) Rad 50 ATPase, Rad 32 ATPase, Rad 50 S mutant, Rad 32 D25A mutant, Exo 1 mutant, Rad 32 D25A mutant, Rad 32 D25B mutant, Rad 32 D25A mutant, Rad 3 Rad 50 S Exo 1 and Rad 50 S Exo 2 Rad50 ATPase and DNA repair have an effect on the DNA damage. Rad 32 D25A, Rad 32 D25A Rad 32 D25A is an important DNA repair activity. Rad 50 's ATPase gene and Rad 32 's ATPase Rad 50 S and Rad 3 2-fold variant DNA maintenance Rad 32 D25 A is a mutant plant. (2)The relationship between budding yeast and DNA fragmentation is reported. Arp 8 DNA repair function is regulated by Arp 8 DNA repair function. The result of the yeast, budding yeast, splitting yeast Arp 8 strain DNA susceptibility In addition, the gene expression of Rhp51 was detected by PCR, and the gene expression of Rhp51 was detected by PCR. Arp 8 is the key to DNA repair.