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染色体サイクルの進行に必要な新規テロメア関連蛋白質の探索とその機能解析

寻找染色体周期进展所需的新型端粒相关蛋白及其功能分析

基本信息

批准号：
20055014
负责人：
上野勝
金额：
$ 2.94万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

Pot1は分裂酵母からヒトまで保存された一本鎖テロメア結合蛋白質で、分裂酵母pot1破壊株のテロメアDNAは急激に消失する。我々はpot1破壊株のテロメア消失がRecQ型ヘリケースrqh1の破壊によって抑圧されること、pot1 rqh1二重変異株は微小管重合の阻害剤であるTBZに感受性になることなどを発見している。そこで本研究はpot1 rqh1二重変異株のTBZ感受性原因解析を目的とした。まず、pot1 rqh1二重変異株が染色体分配すなわちM期の進行に異常があるかどうかを調べるために、微小管に蛍光蛋白質を融合した株を作成し、微小管の伸びる様子をライブ観察した。その結果、pot1 rqh1二重変異株はそれぞれの一重変異株に比べて高い頻度で微小管ののびが遅い細胞があることがわかった。pot1 rqh1二重変異株のテロメアが組換えで維持されていることと、パスルフィールドゲル電気泳動の結果から二重変異株あ染色体末端が絡まっていることが示唆されていることから、染色体末端の絡まりがM期の進行を阻害していると考えている。そこで、この末端の絡まりがテロメア間での組換え中間体かどうかを調べるためにpot1 rqh1二重変異株がRPAフォーサイを持っているかどうかを調べた。そのためにRPAの大サブユニットをコードしたRad11にGFPを融合した株を作成し、ライブ観察を行なった。その結果、二重変異株は、M期の始めから終わりまでRPAフォーサイを持っている細胞の頻度が非常に高いことがわかった

The Pot1 cleavage yeast strain DNA was stored in one book, and the cleavage yeast strain DNA was rapidly disappeared. We found that the pot1 broken plant was damaged and disappeared, the RecQ type was broken, the rqh1 was broken, the inhibition was caused by the microtubule overlap, and the pot1 rqh1 double was blocked by the microtubule coincidence. The susceptibility of the TBZ was blocked by the microtubule. Objective to analyze the causes of pot1 rqh1 susceptibility in this study. The chromosomal distribution of the double clones of Hymenoptera and pot1 rqh1 were detected during the period of chromosomal distribution. The microtubules were detected by the fusion of microtubules, light proteins and microtubules. The results showed that the double strain of pot1 rqh1 had a higher degree of microtubule than that of the other two plants. The double pot1 rqh1 strain was used to maintain the performance of the double strain. The results of the double strain showed that the chromosome end-to-end test was successful, and the chromosome end-to-end test was carried out in the second phase. This is the first time that the two-fold pot1 rqh1 plant has the same weight as that of the RPA plant in the system. This is the first time that the Rad11 GFP has been fused into a plant, and that it will be observed in the first place. The results of the test, double strain, phase M, phase two, phase M, phase, phase, temperature, temperature and temperature.