权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

翻訳終結因子eRF3のmRNA分解制御機構の構造生物学的解析

翻译终止因子eRF3 mRNA降解控制机制的结构生物学分析

基本信息

批准号：
16790032
负责人：
大澤匡範
金额：
$ 2.18万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)eRF3とPABPの相互作用解析eRF3(64-94)には、PABCに結合するPAM2と呼ばれるモチーフが2個存在し(モチーフ1、モチーフ2)、両者は一部重複しており、PABCはeRF3のモチーフ1に結合した状態とモチーフ2に結合した状態との間で化学交換していることが分かった。そこで、PABC-eRF3(モチーフ1)複合体、PABC-eRF3(モチーフ2)複合体それぞれの立体構造をNMR法により解析し、交換している2状態の立体構造を明らかにした(投稿準備中)。現在、この化学交換を伴うユニークな分子認識様式の生物学的意義を明らかにすべく、化学交換の抑制された変異体を用いて翻訳終結反応に対する影響を調べている。(2)PABPの多量体化についての解析前述のeRF3-PABPの相互作用は、細胞内では、mRNAの3'末端のポリA上で多量体化したPABPにより担われているが、ポリA上でのPABPの多量体化状態はこれまでに明らかになっていない。そこで、ポリA結合型PABPの多量体化状態を解明するため、全長PABPおよびPABPの細分化された各ドメインの調製法を確立した。これまでにPABPに4個繰り返し存在するRNA Recognition Motif (RRM)と、RRMとPABCを隔てているリンカー領域とがポリA依存的に相互作用することを見出し、この相互作用がポリA上でのPABP多量体化に寄与していることが強く示唆された。現在、NMRによる相互作用残基の同定に取り組んでいる。

(1) Analysis of the interaction between eRF3 and PABP eRF3 (64-94): PABC is bound to PAM2, PA PABC-eRF3 (1) complex and PABC-eRF3 (2) complex are the three dimensional structures of the two states analyzed and exchanged by NMR (submission preparation). Now, the chemical exchange is accompanied by molecular understanding of the biological significance of the expression, chemical exchange inhibition, and the use of reverse transcription. (2) Analysis of the multiple quantification of PABP The interaction between eRF3 and PABP described above is not only intracellular, but also the multiple quantification of PABP at the 3'end of mRNA. The modulation method of the multi-dimensional state of PABP, the full-length PABP and the subdivision of PABP is established. There are four distinct RNA Recognition Motif (RRM) and RRM and PABC in the PABP domain, and there are four distinct RNA Recognition Motif (RRM) and RRM and PABC domains in the PABP domain. Now, NMR, the identity of the interacting residues is determined.