权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

癌転移抑制剤の標的タンパク質・パキシリンのX線結晶構造解析

癌症转移抑制剂靶蛋白桩蛋白的 X 射线晶体结构分析

基本信息

批准号：
16790069
负责人：
廣瀬まゆみ
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Osaka University (2005)Osaka Bioscience Institute (2004)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790069/
关键词：
パキシリン X線結晶構造解析リン酸化蛋白質リン酸化タンパク質

项目摘要

インテグリン裏打ちタンパク質の一つであるパキシリンはインテグリン刺激によって最もチロシンリン酸化されるタンパク質の一つであり、これまでの知見からパキシリンのチロシンリン酸化が細胞運動に深く関与していることが分かっている。本研究では、パキシリンが癌転移抑制剤の標的タンパク質になると考え、その三次元構造を明らかにし、癌転移治療薬開発に重要な情報を提供することを目的としている。パキシリンの構造は大きく二つの構造からなる。すなわち、N末端部分はチロシンリン酸化部位および5つのLDモチーフから構成され、C末端部分は4つのLIMドメインから構成されている。パキシリンのチロシンリン酸化部位は、Tyr31/Tyr118およびTyr40/Tyr181はN末端部位に含まれており、パキシリンのN末端部位のGST融合パキシリンをバキュロウイルス発現系にて作製し立体構造解析のための結晶化を試み、微結晶を得た。また、Tyr31/Tyr118あるいはTyr40/Tyr181についてリン酸化を受けないPheに変異させたパキシリンをバキュロウイルス発現系にてタンパク質を作製し、mgオーダーで純度95%のタンパク質を得ることに成功した。Pheに変異させたパキシリンをSrcなどキナーゼ作用させ、in vitroにおけるパキシリンのリン酸化を行い、リン酸化パキシリンをイオン交換クロマトグラフィーで分離後、マススペクトロメトリーにてリン酸化の確認を行い、パキシリンがTyr31/Tyr118あるいはTyr40/Tyr181のみがリン酸化されていることを確認した。また、これらの変異パキシリンの微結晶を得ることにも成功した。これまで、パキシリンを含むパキシリンファミリーについて、高純度かつ高濃度の精製に成功した例はない。本課題でのパキシリン発現・精製技術の確立によって、今後のパキシリンファミリーの三次元立体構造研究のための技術提供に大きく寄与した。

In the case of cell movement, cell movement is closely related to cell culture and cell culture, and cell culture is closely related to cell culture and cell culture. This study aims to provide important information for the development of cancer metastasis therapy by examining the nature of three-dimensional structures as targets for cancer metastasis inhibitors. The structure of the structure is very large and the structure is very small. N-terminal part is composed of acid part and C-terminal part is composed of LIM part. Tyr31/Tyr118 and Tyr40/Tyr181 are the N-terminal sites of the protein. GST fusion at the N-terminal sites of the protein is used to prepare the protein. Tyr31/Tyr118 was successfully recovered from Tyr40/Tyr181 in the process of acidification. Phe is different from the original, in vitro, in the acid, in the acid. The difference between the two is that This is a good example of high purity, high concentration and refinement. This project aims to establish and provide the technology for three-dimensional structure research in the future.