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食物依存性運動誘発アナフィラキシーにおける原因蛋白小麦グルテニンのエピトープ解析

小麦麦谷蛋白的表位分析，小麦麦谷蛋白是食物依赖性运动引起的过敏反应的致病蛋白

基本信息

批准号：
16790642
负责人：
新原寛之
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Shimane University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

小麦製品摂取後の運動時にアナフィラキシー症状を呈した患者について,小麦製品の摂取と運動負荷,アスピリンの摂取を組み合わせた誘発試験を行い,小麦による運動誘発アナフィラキシーと確定診断した患者血清を収集した。これらの患者血清について精製小麦グルテン構成蛋白質(α-グリアジン,β-グリアジン,γ-グリアジン,ω-5グリアジン,ω-1,2グリアジン,高分子量グルテニンと低分子量グルテニン)に対するIgE抗体の反応性をドットブロット解析により検討した結果,小麦依存性運動誘発アナフィラキシー患者にはω-5グリアジンに最も強く反応するグループと,高分子量グルテニンに反応する2つのグループがあることを見いだした。まず、高分子量グルテニンのIgE結合エピトープを決定するために、SPOTsメンブレン(SIGMA-Genosys社)上に高分子量グルテニンのアミノ酸配列を基にデザインしたオーバーラップペプチド(14アミノ酸長、オフセット7アミノ酸)を合成しペプチドアレイを作製した。ドットブロット解析で高分子量グルテニンに対する特異的IgE抗体価が高かった患者6名の血清IgEについて、作製したペプチドアレイに対する反応性を調べた。その結果、血清IgEはいくつかのペプチドに結合する事が明らかとなった。さらに、IgEが反応したペプチドには共通して、QQPGQ, QQPGQGQQ, QQSGQGQ配列が含まれており、これらの3種の配列がIgE結合エピトープであると予想された。次に、これら3種のペプチド(QQPGQ, QQPGQGQQ, QQSGQGQ)を合成し、患者血清IgEの反応性を調べた結果、それぞれの患者のIgE結合エピトープは、患者1はQQPGQ、患者2はQQPGQGQQ, QQSGQGQ、患者3はQQSGQGQ、患者4はQQPGQ, QQSGQGQ、患者5,6はQQSGQGQであると決定した。

The wheat product is selected from the group consisting of exercise load, exercise induction test and serum collection. Purified wheat protein constitutes protein in the serum of patients (α-,β-,γ-,ω-5,ω-1,2-, high molecular weight, low molecular weight) The results of the analysis of IgE antibody reactivity were as follows: wheat-dependent motor response was the strongest response in patients with ω-5-,ω-1,2-, high molecular weight and low molecular weight. High molecular weight polymer The IgE binding site of high molecular weight compounds was determined by SPOTs-based method (SIGMA-Genosys). The acid sequence of high molecular weight compounds was determined by SPOTs-based method (14-acid length, 7-acid). High molecular weight IgE antibody levels were detected in 6 patients with high serum IgE levels, and the activity of IgE was modulated. The results, serum IgE, and the combination of the two are clear. In addition, IgE binding is common, QPGQ, QPGQGQQ, QSGQGQ are arranged in three kinds of arrangements, including IgE binding. Next, the synthesis of three kinds of IgE (QQPGQ, QQPGQGQQ, QQSGQGQ), the regulation of IgE reactivity in patients, the determination of IgE binding in patients, patient 1: QQPGQ, patient 2: QQPGQGQQ, QQSGQGQ, patient 3: QQSGQGQ, patient 4: QQPGQ, QQSGQGQ, patient 5, 6: QQSGQGQ.