EF-handカルシウム結合モチーフを持つタンパク質のX-線結晶構造解析

具有 EF-hand 钙结合基序的蛋白质的 X 射线晶体结构分析

• 批准号: 05F05455
• 负责人: 中野 實
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05F05455/
• 关键词: 高次構造; 結晶構造解; EF-handモチーフ; S100タンパク質; 結晶構造解析; EF-hand モチーフ

EF-handモチーフは多くのタンパク質に存在するカルシウム結合ドメインであり、タンパク質の活性化及び他のタンパク質との相互作用に関わると考えられている。本研究では、EF-handモチーフを持つS100A13,S100A14,VILIP-1の機能を解明する為に、X-線結晶構造解析法によりタンパク質の三次構造の決定をめざした。S100A13タンパク質はカルシウム結合型の結晶化に成功し(2006年論文発表)、X-線回折データを得て結晶構造を決定した(投稿中)。S100A13は銅イオンとの結合も報告されており、S100A13の銅結合型の結晶化条件を決定し最適化を行った。S100A14はヒト腎臓cDNAライブラリーからクローニングし、pET42b(+)ベクターに挿入、BL21(DE3)発現用大腸菌をトランスフォーム後、発現を誘導した。S100A14は可溶性タンパク質として発現し、His-bindクロマトグラフィー、Ammonium sulfate沈殿、陰イオン交換クロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィーの順で精製を行った。結晶化はシッティングドロップ蒸気拡散法でCrystal Screen HT及びWizard I、 IIを用いて行った。PEG8000を沈殿剤とした条件の最適化を行った。VILIP-1はヒト脳cDNAライブラリーからクローニングし、pET42b(+)ベクターに挿入、BL21(DE3)発現用大腸菌をトランスフォームした。発現した可溶性VILIP-1タンパク質はHis-bindクロマトグラフィー、陰イオンクロマトグラフィー、及びゲルろ過クロマトグラフィーの順で精製した。結晶化はシッティングドロップ蒸気拡散法でCrystal Screen HT, Wizard I、 IIを用いて条件検討を行った。得られた結晶化条件の最適化を行った。

The EF-hand switch is related to the existence of multiple tangibles, the activation of tangibles, and the interaction of other tangibles. In this study, the function of EF-hand crystal analysis method for determining the tertiary structure of S100A13, S100A14,VILIP-1 was studied. S100A13: Crystallization of S100A13 is successful (2006 paper), X-ray diffraction is successful (submission). S100A13 copper-bonded crystallization conditions were determined and optimized. S100A14 is a protein encoding cDNA, pET42b (+), BL21 (DE3), and is induced by E. coli. S100A14 Soluble Dissolution, His-bind Dissolution, Ammonium Sulfate Dissolution, Yin Dissolution Dissolution, Dissolution Dissolution Crystal Screen HT and Wizard I and II are used in crystallization. PEG8000 is designed to optimize the operating conditions. VILIP-1 responds to cDNA translation, pET42b(+) translation, BL21(DE3) translation, and E. coli translation. Discovering solubility of VILIP-1 in His-bind, Yin-bind, and Y-bind Crystal Screen HT, Wizard I and Wizard II were studied under different conditions. The crystallization conditions were optimized.

项目成果

Crystal structure of calcium-bound human S100A13 at 1.8-Å resolution

钙结合的人 S100A13 的晶体结构，分辨率为 1.8-Å

• 发表时间: 2007
• 作者: Xiuli Lu;Fukushi Kambe;Xia Cao et al.;T.Ishida;Imai Fabiana Lica;Imai Fabiana Lica;Fabiana Lica Imai
• 通讯作者: Fabiana Lica Imai

Crystallization and preliminary X-ray analysis of human S100A13

人S100A13的结晶和初步X射线分析

• 发表时间: 2006
• 期刊: Acta Crystallographica Section F 62
• 作者: Fabiana;Lica;Imai
• 通讯作者: Imai