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ポリケチド系抗生物質生合成系の分子解析と新物質創成への応用

聚酮类抗生素生物合成体系的分子分析及其在新材料制备中的应用

基本信息

批准号：
05J08506
负责人：
遠山茂広
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

Streptomyces halstedii HC34株は2種のポリケチド化合物、ビセニスタチン及びハルストオクタコサノリドの生産能を有する。昨年度、ハルストオクタコサノリド生合成遺伝子クラスターの全塩基配列を決定したことより、両化合物の全生合成遺伝子が明らかになった。そこで、本年度はこれら2種の遺伝子クラスターを利用し、新規ポリケチド化合物の創製を目指し研究を進めた。ポリケチド化合物の主鎖部分は巨大なモジュラー型ポリケチド合成酵素(PKS)により構築される。2種のポリケチド化合物の生合成に関与するPKSを組み替えることで、2種の化合物の構造的特徴を有した新規化合物の創製を目的とし、以下の2種の手法を考案した。1つめはローディングモジュールの組み替えであり、これによってビセニスタチンの特徴的なスターターがハルストオクタコサノリドに導入されることが期待できる。もう一方はPKS同士のタンパク質問相互作用に重要なリンカー部を組み替えることでビセニスタチンとハルストオクタコサノリドのキメラ化合物の取得を目指した。PCR法やゲノムライブラリーを用い、必要なDNA断片のクローニングを繰り返すことによって、種々のベクターを用いて変異株作成用プラスミドの構築に成功した。現在までに、S.halstedii HC34株の形質転換には成功していないものの、これら準備したプラスミドを用いて作成した変異株のポリケチド生産能は興味深い。また、ハルストオクタコサノリド生合成遣伝子クラスターに存在する2つのシトクロームP450モノオキシゲナーゼ(HlsH, HlsI)について、発現タンパクによる機能解析を行った。HlsIの活性を検出することができなかったが、HlsHについてはハルストオクタコサノリドBからAへと変換する触媒活性を酵素レベルで確認することに成功した。

Streptomyces halstedii HC34 strain has the ability to produce two kinds of compounds, viscid and viscid. In the past year, the total base alignment of the compound was determined, and the total synthesis of the compound was determined. This year, we will make progress in the research on the utilization and creation of new compounds. The main part of the complex is constructed by a giant complex synthase (PKS) The synthesis of two kinds of compounds is related to the PKS composition, the structural characteristics of two kinds of compounds are related to the purpose of creating new compounds, and the following two methods are investigated. 1. The characteristics of a group of people who are interested in a group. The interaction between PKS and PKS is an important part of the interaction between PKS and PKS. The PCR method was successfully constructed for the use of DNA fragments in the production of mutants. Now, S.halstedii HC34 strain has been successfully transformed into a new strain, which is ready for use. The function analysis of the function analysis. The activity of HlsI was detected and confirmed successfully.