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ハンタウイルスレセプターの同定〜エンベロープ蛋白組換ウイルスを用いたアプローチ

汉坦病毒受体的鉴定——使用包膜蛋白重组病毒的方法

基本信息

批准号：
05J08973
负责人：
奥村恵
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでの結果から、MDBK細胞は、30種類以上の哺乳類由来細胞の中で唯一ハンタウイルスエンベロープ蛋白を外被したシュード型VSV、シュード型レトロウイルスおよびnativeハンタウイルスに感受性を示さないことが分かった。ハンタウイルス高感受性であることが明らかとなったA549およびACHN細胞株から抽出したトータルmRNAを用いてcDNAライブラリーを作製した。遺伝子スクリーニング作業を遂行するためにMDBK細胞株のトランスフェクション条件をさまざまな手法を用いて検討したが、スクリーニング実験に耐えうるような導入効率の条件は得ることができなかった。しかし、単一の遺伝子導入試験は可能と考えられたため、αvβ3インテグリンをMDBK細胞に導入・発現し、それによってハンタウイルス感受性が増強するか否かを検討するために、αvおよびβ3インテグリン発現ベクターを調整した。導入試験については現在継続中である。また、トッタパラヤンウイルス(TPMV)は唯一齧歯類以外(スンクス)から分離されたハンタウイルス株である。TPMVのS segmentは、塩基・アミノ酸配列ともに他の齧歯類由来株とは大きく異なり、その宿主および病原性についてはまったくの不明である。一般にハンタウイルスは特定の齧歯類を自然宿主として共進化してきたと考えられるが、もしTPMVの自然宿主がスンクスであった場合、他の齧歯類由来株とは標的レセプターや感染機構が大きく異なっていることが予想されるため、TPMVのふるまいを知ることは非常に重要である。そのため、まずTPMVの抗原性を詳細に解析し、MAb E5/G6エピトープを有するTPMV組換N抗原を開発した。これを用いた診断系を確立し、東南アジア由来不明熱患者血清および野外捕獲スンクス血清の抗体調査を行ったところ、ヒト患者1例、スンクス2例から陽性反応を得た。さらにこれらからはTPMV中和抗体陽性が確認された。ヒトおよび動物でTPMV感染例がはじめて確認され、今後のTPMV研究の足がかりを作ることができた。

MDBK cells are unique among more than 30 types of mammalian derived cells, including VSV, VSV, VSV and VSV. A549 and ACHN cell lines are highly susceptible to cDNA amplification. The conditions for the introduction of MDBK cell lines are discussed in detail below. In addition, the introduction of a single gene into MDBK cells may be regulated by the following factors: αvβ3 gene expression, αvβ3 gene expression, αv β3 In the meantime, I'm trying to find a way out. TPMV is the only species that can be isolated from other species. TPMV's S segment, base, and acid alignment, and other species of rodent origin, and host, and pathogenicity, are unknown. In general, it is very important to know the origin of TPMV and the origin of TPMV, and to know the origin of TPMV and the origin of infection mechanism. TPMV antigenicity analysis, MAb E5/G6 antigenicity analysis, TPMV antigenicity analysis, MAb E5/G6 antigenicity analysis The diagnosis system was established, the serum of patients with fever of unknown origin was captured in the field, and the antibody was detected in 1 patient and 2 patients. TPMV neutralizing antibody positive was confirmed. TPMV infection in animals is confirmed and future TPMV research is conducted.