NK4産生細胞封入マイクロカプセルを用いた膵癌の新規治療法の開発

使用封装 NK4 产生细胞的微胶囊开发胰腺癌新治疗方法

• 批准号: 05J09329
• 负责人: 青柳 靖之
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: University of Tsukuba (2006-2007)Osaka University (2005)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J09329/
• 关键词: NK4; マイクロカプセル; 細胞封入

これまでHepatocyte Growth Factor (HGF)とその受容体であるc-Metの関係をブロックする治療物質としてNK4を用いてきたがこれは癌細胞の増殖を抑制する静細胞的な効果物質である。更なる治療効果を上げるために積極的に細胞を殺す殺細胞効果のある物質の開発を考案した。c-Metとの結合部位であるNK4のN端配列の一部(NK1)と緑膿菌外毒素(PE)の一部を結合させた融合タンパク(NK1-PE)の作製を行った。NK4プラスミドのNK1配列とIL13-PEプラスミドのIL13配列を組み替える事によりNK1-PEのコンストラクトを作製した。タンパク発現をlmM IPTG、37℃で3時間誘導を行い、不溶性に発現したタンパクを回収した後リフォールディング、FPLCによる精製を行ったが収量を増やす事は困難であった。次に収量を増やす為に上記で作製したコンストラクトのNK1-PE部分をpGEX-2Tベクターに組み込む事によりGSTタグを融合させたタンパクの作製を試みた。また宿主の菌はOrigami株を用いた。タンパク発現を0.lmM IPTG、24℃で一晩誘導する事により可溶性に発現する事ができた。このタンパクをグルタチオンセファロースに結合後、トロンビンによりGSTを切断して回収する事で問題を改善する事ができた。in vitroにて膵癌細胞にNK1-PEを添加し(0.1ng/ml〜100μg/ml)、72時間後に生死細胞の評価を行った。c-Metが高発現しているSUIT-2、 AsPc-1での殺細胞効果は決して高くなく、低発現のしているBxPc-3やMiaPaca-2である程度の殺細胞効果が認められた。これは作製したNK1-PEがこれまで報告されているNK4が血管新生を抑制する経路上のc-Met以外の細胞表面上に発現している受容体に結合しPEの作用により死滅した可能性が示唆された。

The Hepatocyte Growth Factor (HGF) is a therapeutic substance that inhibits the proliferation of cancer cells. Further research on the development of active cell-killing substances The binding site of c-Met and N-terminal alignment of NK4 (NK1) and Pseudomonas exotoxin (PE) was studied. NK1-PE and NK4-PE are arranged in the same way as IL13-PE. 1 mM IPTG at 37 ° C, 3 hours at 37 ° C, 10 minutes at 37 ° C The next step is to increase the amount of GST in the NK1-PE part of the system. The host bacteria were used. 0.1 mM IPTG, 24℃ overnight induction, soluble development The problem is that the GST has been cut off and the problem has been solved. NK1-PE was added to cancer cells in vitro (0.1ng/ml ~ 100μg/ml), and the cells were evaluated after 72 hours. The cell-killing effect of c-Met is higher in SUIT-2 and AsPc-1 than in BxPc-3 and MiaPaca-2. This is an indication of the possibility that NK1-PE may inhibit angiogenesis and may bind to receptors other than c-Met on the cell surface.

项目成果

局所進行膵癌に対するGemcitabineを用いた放射線化学療法

使用吉西他滨放化疗治疗局部晚期胰腺癌

• 发表时间: 2007
• 作者: 山田圭一;小田竜也;青柳靖之;橋本真治;榎本剛史;福永潔;近藤匡;佐々木亮孝;大原潔;大河内信弘
• 通讯作者: 大河内信弘

Consistent liver metastases in a rat model by portal injection of microencapsulated cancer cells.

通过门静脉注射微囊癌细胞在大鼠模型中观察到一致的肝转移。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Cancer Res. 66(23)
• 作者: Enomoto T;Oda T;Aoyagi Y;Sugiura S;Nakajima M;Satake M;Noguchi M;Ohkohchi N
• 通讯作者: Ohkohchi N

Microfabricated airflow nozzle for microencapsulation of living cells into 150 micrometer microcapsules

• DOI: 10.1007/s10544-006-9011-9
• 发表时间: 2007-01
• 期刊: Biomedical Microdevices
• 影响因子: 2.8
• 作者: S. Sugiura;T. Oda;Y. Aoyagi;R. Matsuo;Tsuyoshi Enomoto;Kunio Matsumoto;Toshikazu Nakamura;Mitsuo Satake;Atsushi Ochiai;N. Ohkohchi;M. Nakajima

ストレプトアビジン化、ビオチン化磁性ナノ粒子を用いた特異的相乗集積法の開発(1)

使用链霉亲和素和生物素化磁性纳米颗粒开发特定的协同整合方法 (1)

• 发表时间: 2008
• 作者: 山田圭一;高木俊之;青柳靖之;金森敏幸;小田竜也
• 通讯作者: 小田竜也

癌の電磁波加温療法に向けた癌細胞集積型ナノ磁性体の開発

开发用于癌症电磁波加热治疗的癌细胞整合纳米磁性材料

• 发表时间: 2008
• 作者: 山田圭一;高木俊之;青柳靖之;金森敏幸;小田竜也
• 通讯作者: 小田竜也