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体細胞核移植による効率的なクローンミニブタ作出システムの確立

利用体细胞核移植建立高效克隆小型猪生产系统

基本信息

批准号：
16688008
负责人：
三好和睦
金额：
$ 19.64万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16688008/
关键词：
体細胞クローニング核移植ミニブタ

项目摘要

我々はこれまでに、超音波の照射による新しい卵子活性化法を開発し、同法を体細胞核移植に応用してクローンミニブタを作出することに成功した。しかし、得られたミニブタは生後41日で死亡したので、その正常性には疑問が残った。そこで本年度は、再度クローンミニブタの作出を試みるとともに、作出効率に影響を及ぼすと予想されるレシピエント卵子の除核法を最適化した。新たに3匹のクラウン系ミニブタ胎子から線維芽細胞を採取し、除核卵子に移植してクローン胚を作製した。これらを超音波活性化後に3頭のクラウン系ミニブタ仮親に移植した結果、1頭の産子が得られた。マイクロサテライトDNAマーカーを用いて解析した結果、この産子が核移植に用いた細胞の1つと同一の遺伝子型を持つクローン動物であることが確認された。現在このクローンミニブタは生後5ヶ月であるが、順調に生育しており、正常性に問題はないと考えられる。無処理のブタ卵子核を顕微鏡下で観察することは困難であるので、除核においてはその位置を把握する方法の開発が重要となる。従来は、核を染色した後に紫外線を照射してその位置を確認する方法が広く用いられてきたが、最近になって、卵子をディメコルシンおよびスクロースで処理すると核を含む細胞質の小さな突出が形成され、それを除去することによって容易に除核し得ることが報告された。そこで、ブタ卵子の核突出に及ぼすこれらの成分の影響について検討した結果、0.2μg/mlのディメコルシンで30分間処理することにより、効率的に核突出を誘起し得ることが示された。また、スクロースはブタ卵子の核突出に影響を及ぼさないことが明らかになった。

The new method of egg activation was opened by ultrasound irradiation, and the nuclear transfer was successfully performed by the same method. She died 41 days after birth, suffered from normal sex, suspected disability, and died after birth. In the current year, we will try again to enucleate the ovum. We will make an attempt to optimize the egg enucleation. The new baby was born in the fetus, the bud was harvested, and the enucleated eggs were transferred. After the activation of ultrasound, the results of transplantation after 3-month-old ultrasound activation and 1-year-old pregnancy were confirmed. This is the first time to analyze the results of the DNA test, and to make sure that the result of the nuclear transfer is not the same as that of the same child. Now we are going to have a pregnancy in the fifth month after birth, to have a baby, to have a baby, and to have normal sexual problems. In order to understand the location of the nucleus of the ovum, it is necessary to determine the location of the egg nucleus, and the location of the egg nuclear microcomputer. grasp the method to open important information. After staining, the ultraviolet ray is used to confirm the location of the cell. The method is to confirm the location of the cell. The method is to confirm the location of the cell. The method is to determine the location of the cell. The method is to confirm the location of the cell. The method is to confirm the location of the cell. The method is to confirm the location of the cell. The method is to confirm the location of the cell. The method is to confirm the location of the cell. The nuclear protrusions of eggs and eggs, and the composition of nuclear protrusions in eggs were analyzed. The results of the experiments, 0.2 μ g