潜在する微生物テルペノイドの発掘及び新型テルペン環化酵素遺伝子の取得

潜在微生物萜类化合物的发现和新萜环化酶基因的获得

• 批准号: 17780088
• 负责人: 佐藤 努
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17780088/
• 关键词: テルペノイド; イソプレノイド; テルペン; Mycobacterium; 生合成; テルペン環化酸素; テルペン環化酵素

生合成研究:Mycobacterium chlorophenolicumから単離されたC_<35>環状テルペンはZ型のC_<35>直鎖状ポリプレニルニリン酸の環化反応によって生合成されると予想している。それを支持する証拠を得るため、市販の安価な試薬から容易に合成できる短鎖のC_<10>とC_<15>のポリプレニルニリン酸を基質として用いて無細胞抽出液と反応させた。E型のC_<10>ポリプレニルニリン酸は反応しなかったのに対し、Z型はC_<35>環状テルペンの部分構造と類似したリモネンを生成した。また、ω.E.E体のC_<15>のポリプレニルニリン酸も反応せず、ω, Z, Zで体は環化反応した。これらの結果は、Z型のポリプレニルニリン酸にのみ基質特異性をもつテルペン環化酵素が存在することを示していた。現在知られているテルペン環化酵素はE型を天然基質とするものだけであることから、新規性の高いテルペン環化酵素が存在していることが示唆された。遺伝子クローニング:昨年度までに2つのZ型プレニルトランスフェラーゼ遺伝子の一部を縮重プライマーによってクローニングしていた。今年度、染色体歩行によって上・下流の塩基配列を読み進んだ。高いGC含量の影響等により容易に読める配列ではなかったが、様々なシーケンス反応の条件を検討し改良した結果、Z型プレニルトランスフェラーゼ遺伝子の全長を読むことができた.現在、更に上・下流を読むことによってC_<35>環状テルペン生合成酵素の候補遺伝子を探している.また、2つのZ型プレニルトランスフェラーゼの生成物を同定するため、pET系ベクターで発現させる実験を進行した。

Biosynthesis of Mycobacterium chlorophenolicum: The synthesis of C<35>_(2-)-cyclo-p-(2-)-cyclo-p-(2-)-cyclo-p-<35>cyclo-p The results show that <10>C_2C_2O_3 can be easily synthesized in the presence of C_2O_3 and C_2O_3<15>. E type C<10>_ring type C_<35>ring type C_(2)-(3)-(4)-(4-(4)-(4)-<15>( The results showed that Z-type cyclase was present in the presence of substrate-specific cyclase. It is now known that there is a high level of cyclase activity in the E-type. A part of the Z-shaped film is called a "Z-shaped film". This year, the chromosome movement is divided into two parts: the upper part and the lower part. The effect of high GC content is easy to arrange. The conditions of reverse reaction are discussed. The results are improved. The length of Z-type reverse reaction is improved. Now, we are exploring candidate genes for C_<35>loop biosynthesis enzymes. The product of the Z-shaped film is determined simultaneously, and the pET system is developed.

项目成果

Mycobacterium tuberculosis H37Rv3377c encodes the diterpene cyclase for producing the halimane skeleton

• DOI: 10.1039/b415346d
• 发表时间: 2005-02-28
• 期刊: CHEMICAL COMMUNICATIONS
• 影响因子: 4.9
• 作者: Nakano, C;Okamura, T;Hoshino, T
• 通讯作者: Hoshino, T