インスリン刺激によるLXR活性化機構の解明

阐明胰岛素刺激诱导的 LXR 激活机制

基本信息

批准号：
17790617
负责人：
袴田秀樹
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790617/
关键词：
インスリン LXR 酸化ステロールメタボリックシンドローム脂肪肝

项目摘要

LXRのリガンドとなる酸化ステロールの簡便な定量分析には、高感度、高精度な分離分析法の開発が必要であり、これまでの基礎的検討の結果を基に、電気化学検出HPLCに注目した。ところが、従来酸化還元物質の範疇には入らない酸化ステロールを、誘導体化なしで直接酸化して電気化学検出する方法論が存在しなかったため、より一般的なステロイド化合物を用いて、この検出法による分析法を確立する必要性を痛感した。そこで、多くの分析法によって定量されているコレステロールを分析対象として用い、電気化学検出HPLCによる血清コレステロールの定量法を開発することとした。ボルタンメトリーを用いて種々の検出条件を検討した結果、コレステロールを酸化できる条件を発見した。そこで、これを検出器に組み込んだ電気化学検出HPLCを構築し、血清試料として、和光純薬製及びNIST(米国国立標準技術研究所)の標準血清中のコレステロール定量を行った。認証値と比較した場合の真度、繰り返し測定したときの精度、添加回収試験、それぞれ良好な結果を得た。これらの結果は、Joumal of Chromatography A1166:135-141(2007)において発表した。本論文中では、いくつかの酸化ステロール標準品をコレステロールと同時に分離定量できることを示しており、感度の向上と試料前処理の改善によって、酸化ステロール分析へと応用できると考えている。その他、酸化ステロールをより高感度に定量するための予備的検討として、キャピラリー液体クロマトグラフィーやLC/MS/MSを用いる薬物の高感度定量法を開発した。

对LXR的配体的氧化固醇的简单定量分析需要开发高度敏感且高度准确的分离分析方法，并基于先前基本研究的结果，我们重点介绍了电化学检测HPLC。但是，由于没有直接氧化固醇的方法，这些固醇不在不衍生化的氧化物质类别中，而不会直接氧化氧化固醇，而氧化固醇不会属于不属于减少氧化物质类别的氧化固醇，因此它已经敏锐地意识到需要使用这种检测方法来建立一种使用更一般的固醇固醇组合的分析方法。因此，我们决定使用通过通过许多分析方法定量的胆固醇作为分析的胆固醇来开发一种使用电化学检测HPLC来量化血清胆固醇的方法。使用伏安法检查了各种检测条件，并发现了允许胆固醇被氧化的疾病。因此，在检测器中使用它构建了电化学检测HPLC，并在Wako Pure Chemical和NIST（国家标准技术研究所）作为血清样品中量化胆固醇。与经过认证值相比，进行重复测量时的准确性，并获得了添加恢复测试，并获得了出色的结果。这些结果发表在A1166：135-141（2007）色谱A1166：135-141的Joumall中。在本文中，可以证明可以与胆固醇同时分离和定量几种氧化的固醇标准，并且相信可以通过提高敏感性和改善样品预处理来对氧化固醇分析进行应用。此外，作为对更敏感量化固醇的初步研究，我们开发了一种使用毛细血管液相色谱和LC/MS/MS来确定药物的高度敏感方法。