性腺発生・分化過程におけるStAMP遺伝子の発現および制御機構の解析

性腺发育分化过程中StAMP基因表达及调控机制分析

• 批准号: 17791136
• 负责人: 峰岸 一宏
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791136/
• 关键词: StAMP; ステロイド合成; マウス; SF-1; 性依存性発現

目的:StAMP(Steroidogenic acidic mitochondrial protein)は、成体においてステロイドホルモン産生組織(副腎・精巣・卵巣)に発現しており、StAMPがステロイド産生過程に関与している可能性がある。今年度の研究ではステロイド産生機構におけるStAMPの役割の解明を目的とした。方法:マウス副腎皮質腫瘍由来のY1細胞株を用いて、StAMPを標的としたsiRNA(100nM)を導入してOSAPの発現抑制を試み、0.5mM 8Br-cAMPにより刺激されたステロイド産生量について、RNAi活性を示さないnegative control導入群と比較検討した。ステロイド産生量は、培養液中のプロゲステロン濃度とし、RIAにより測定した。成績:siRNAによるStAMPの発現抑制の効果は,リアルタイムRT-PCR法や抗OSAPポリクロナル抗体を用いた免疫細胞化学染色法、ウエスタンブロットにより確認し、mRNA蛋白レベル双方とも約90%の抑制効果を示した。また、StAMPを発現抑制することにより,cAMP刺激後のプロゲステロン産生量はcontrolと比較し約40%減少した。そしてそのステロイド産生量減少は、膜浸透性の高いコレステロールアナログである5μMの22Rヒドロキシコレステロールを投与することにより回復した。尚、siRNA導入後の細胞のviabilityは特に有意に低下しなかった。結論:StAMPは、その発現抑制によりミトコンドリアの機能自体は低下することなくプロゲステロン産生を減少させることが判明し、ステロイド産生機構の主にコレステロールの外膜から内膜への輸送に関与する可能性が示唆された。

Objective:StAMP(Steroidogenic acidic mitochondrial protein) is found in adult tissues (accessory kidney, sperm, and egg) where it is produced. There is a possibility that StAMP may be involved in the production process of steroidogenic mitochondria. This year's research is aimed at clarifying the role of STAMP in the development of mechanisms. Methods: Y1 cell lines derived from adrenal cortical tumors were introduced with siRNA targeting StAMP (100nM) to inhibit the development of OSAP, 0.5 mM 8Br-cAMP to stimulate the production of OSAP, and RNAi activity to demonstrate negative control. The amount of the protein produced was determined by RIA and the concentration of the protein in the culture medium was determined by RIA. Results: The inhibition effect of siRNA on the expression of StAMP was demonstrated by RT-PCR, immunocytochemical staining, mRNA protein detection, and 90% inhibition of anti-OSAP antibody. The production of cAMP was reduced by about 40% compared with control. The decrease in the amount of carbon dioxide produced and the increase in the permeability of the membrane to 22-micron carbon dioxide were observed. The viability of cells after siRNA introduction is intentionally reduced. Conclusion:StAMP has the ability to reduce the occurrence of tumor in the outer membrane and the transport of tumor in the inner membrane.