未成熟卵子の成熟誘起方法の検討-ヒト型モデルとしてのカニクイザルを用いて-

未成熟卵的诱导成熟方法研究-以食蟹猴为人体模型-

• 批准号: 17791143
• 负责人: 藤浪 菜穂子
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791143/
• 关键词: 動物; 発生・分化; 卵子・胚; 顕微注入; 顕微受精; 顕微授精

カニクイザル卵子の入手時期は冬期がピークであるため、比較的入手が容易であるウサギ未成熟卵子(GV期)を使用して成熟誘起を試みた。昨年度はウサギGV期卵子の細胞質にP34^<cdk1>/cyclinB, Protein Kinaseまたはcdk1/cyclinBの注入を行ったが、MII期卵子の獲得には至らなかった。そこで、ウサギのGV期卵子の卵核胞(GV)にMAP kinaseの注入を施行した。その後、体外培養を行った結果、コントロール区では0%(0/20)であったが、注入区では23%(9/39)がMI期、23%(9/39)がMII期へと進行した。同様の方法を用いて、カニクイザルにおける未成熟卵子の成熟誘起を行った結果、コントロール区では0%(0/21)、注入区では75%(15/20)がMI期、15%(3120)がMII期へと進行した。これにより、カニクイザルにおいてGV期卵子のGVへのMAP kinase注入は、減数分裂を再開させる効果があることが示された。また、得られた力ニクイザルMII期卵子の発生能を検討するため、卵子細胞質内精子注入(ICSI)を施行した。しかし、卵割胚の確認には至らなかった。MAP kinaseの注入による卵子の成熟率は低率であり、成熟を誘起させた卵子は形態的にも異常が多く、そのため質の良い成熟卵子を獲得することが今後の課題である。加えて、Mos/MAPKの活性化を阻害してもGVBDが誘起されるか等を調べ、カニクイザルの卵成熟におけるMPF形成機構についても検討する予定である。

The start period of eggs is winter. It is easy to compare the start period of immature eggs (GV). In the last year, the cytoplasmic P34^<cdk1>/cyclin B, Protein Kinase and cdk1/cyclin B were injected into the eggs at the GV stage, and the eggs at the MII stage were obtained. The injection of MAP kinase into the egg nucleus (GV) of the GV stage is performed. In vitro culture, 0%(0/20) of the cells were injected into the culture medium, 23%(9/39) of the cells were injected into the culture medium, and 23%(9/39) of the cells were injected into the culture medium. The same method was used to induce immature eggs to mature. The results showed that 0%(0/21) of immature eggs were in mature zone, 75%(15/20) in injected zone, MI stage, and 15%(3120) in MII stage. The GV stage egg is injected with MAP kinase, and meiosis is reopened. In addition, the development of MII ovum was investigated and intracytoplasmic sperm injection (ICSI) was performed. The egg is cut and the embryo is confirmed. MAP kinase injection results in low egg maturation rate, induced egg maturation, abnormal egg morphology, high quality, and mature egg acquisition. In addition, the activation of Mos/MAPK is inhibited, GVBD is induced, and MPF formation mechanism is determined during egg maturation.