ギラン・バレー症候群由来のモノクローナル抗ガングリオシド抗体の作成と遺伝子解析

源自吉兰-巴利综合征的单克隆抗神经节苷脂抗体的创建和遗传分析

• 批准号: 17689028
• 负责人: 小鷹 昌明
• 金额: $ 7.65万
• 依托单位: Dokkyo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17689028/
• 关键词: ギラン・バレー症候群; 抗ガングリオシド抗体; モノクローナル抗体

Campylobacter jejuiリポオリゴ糖はヒト末梢神経GM1ガングリオシドと分子相同性を有し、IgG抗GM1抗体価が急性期のギラン・バレー症候群(GBS)患者血中に上昇する。軸索型GBSでは、抗GM1抗体だけでなく、IgG抗GM1b、抗GD1a、抗Ga1NAc-GD1a抗体が単独もしくは組み合わせで検出される。自己抗体は、高い親和性を獲得して病原性を発揮する。その分子基盤は、免疫グロブリン遺伝子の変異頻度が高いことにある。GBSとその亜型患者由来のモノクローナル抗ガングリオシド抗体を得て、その親和性を測定し、免疫グロブリン遺伝子の塩基配列を決定する。得られたモノクローナル抗体を用いて、標的分子(GM1、GM1b、GD1a、Ga1NAc-GD1a、GQ1b、GT1a)のヒト神経系における発現部位、細胞内局在をマッピングする。現在モノクローナル抗ガングリオシド抗体を精力的に作成している。ガングリオシドとアフィニティーが強く、pathogenicな抗ガングリオシドIgG抗体を産生するB細胞クローンを単離する。インフォームドコンセントの得られた、ギラン・バレー症候群患者の末梢血B細胞からRNAを単離し、cDNAを合成する。そのcDNAをpFABsG3-sacBベクター(scFv :イムノグロブリン可変部鎖域)に組み込み、PCRにてイムノグロブリンheavy chainおよびlight chain遺伝子を増幅する。次いで、シャペロンベクターpCDFDuet-1-Smに移し、大腸菌TOP10F'にトランスフォーメーションする。インサートを有する大腸菌をアンピシリン寒天培地上で選択しする。それをさらに大腸菌XL-1 Blueにトランスフォーメーションし、ファージコートタンパクとscFvの融合タンパクを表面に発現したファージを産生させる。ガングリオシドGM1、GDla、GQlbを因相化したファルコンボトルにファージ(大腸菌の培養上清)入れ、八二ングにてガングリオシドと親和性のあるファージをスクリーニングする。現在、DNAの合成中である。

Campylobacter jejui has a high level of IgG anti-GM1 antibodies in the blood of patients with acute phase of GBS. Axonal GBS, anti-GM1 antibodies, IgG anti-GM1b, anti-GD1a, anti-GD1NAc-GD1a antibodies are isolated from each other. The antibody has high affinity and high pathogenicity. The frequency of variation in the molecular matrix and immune system is high. To determine the affinity of anti-GBS antibodies, determine the nucleotide sequence of GBS antigens, and determine the origin of GBS and GBS subtypes. The target molecules (GM1, GM1b, GD1a, Ga1NAc-GD1a, GQ1b, GT1a) and the development sites and intracellular functions of the target molecules were obtained. Now, the anti-virus antibody is produced in the middle of the day. B cell culture is characterized by strong, pathogenic, and anti-B cell IgG antibody production. RNA isolation and cDNA synthesis in peripheral blood B cells of patients with acute respiratory syndrome The cDNA sequence pFABsG3-sacB (scFv : variable-domain variable domain) was amplified by PCR, heavy chain and light chain genes. In the second place, the selection process is carried out according to the following conditions: pCDFDuet-1-Sm, E. coli TOP10F'. Coliform bacteria are present in the soil. The fusion of E. coli XL-1 Blue and E. coli scFv appeared on the surface. GM1, GDla and GQlb are the most important factors in the development of the disease. Now, DNA synthesis is in progress.

项目成果

Side effects with combined therapy of methylprednisolone and intravenous immunoglobulin in Guillain-Barre syndrome.

吉兰-巴利综合征甲基强的松龙和静脉注射免疫球蛋白联合治疗的副作用。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Eur Neurol 53
• 作者: Odaka M;Tatsumoto M;Hirata K;Yuki N.
• 通讯作者: Yuki N.

Spectrum of neurological diseases associated with antibodies to minor gangliosides GM1b and GalNAc-GD1a

• DOI: 10.1016/j.jneuroim.2006.04.005
• 发表时间: 2006-08-01
• 期刊: JOURNAL OF NEUROIMMUNOLOGY
• 影响因子: 3.3
• 作者: Tatsumoto, M.;Koga, M.;Yuki, N.
• 通讯作者: Yuki, N.

Current management of chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy : a treatment protocol proposal.

慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病的当前治疗：治疗方案建议。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Expert Rev Neurother 6
• 作者: Tatsumoto M;Odaka M;Hirata K;Yuki N;Odaka M.
• 通讯作者: Odaka M.

Characterisation of the immunoglobulin variable region gene usage encoding the murine anti-ganglio side antibody repertoire

• DOI: 10.1016/j.jneuroim.2005.04.011
• 发表时间: 2005-08-01
• 期刊: JOURNAL OF NEUROIMMUNOLOGY
• 影响因子: 3.3
• 作者: Boffey, J;Odaka, M;Willison, HJ
• 通讯作者: Willison, HJ

Intractable chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy treated successfully with ciclosporin.

用环孢素成功治疗顽固性慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病。

• 发表时间: 2005
• 期刊: J Neurol Neurosurg Psychiatry 76
• 作者: Oohashi T;Bekku Y;Houliston RS;Van Sorge NM;Van Sorge NM;Overell J;Koga M;Kamitani T;Tatsumoto M;Nagasawa K;Houliston RS;Yoshida T;Funakoshi K;Tatsumoto M;Komagamine T;Gono T;Yuki N;Kimoto K;Comin R;Koga M;Koga M;Koga M;Pandey JP;Yuki N;Li J;Yuki N;Odaka M
• 通讯作者: Odaka M