アクアバイオセンサーとしてのGFPトランスジェニックメダカ系統の開発

开发 GFP 转基因青鳉品系作为水生生物传感器

• 批准号: 17710054
• 负责人: 丸山 耕一
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: National Institute of Radiological Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17710054/
• 关键词: メダカ; GFP; バイオセンサー

本研究の目的は、生体が放射線等の有害な因子に暴露されたときにGFPレポーター遺伝子を発現し、リアルタイムに生きたままその影響をおっていけるメダカ系統を開発することである。まず、候補遺伝子としてGADD45αに焦点をさだめ実験をおこなった。その理由は、1)GADD45α遺伝子は、ヒト培養細胞の系で低線量の放射線で照射後数時間後には発現が増大することが確認されていること、2)通常時ではほとんど発現が見られないこと、3)ヒトなどの哺乳類で発現転写調節領域が詳細に解析されていること、などが挙げられる。GADD45α遺伝子は未だメダカではクローニングされていない遺伝子なので、そのクローニングをおこなった。哺乳類などで取られているGADD45の配列を元に、メダカのゲノムデーターベースを検索、メダカGADD45αのゲノム構造を予想し、メダカゲノムDNAからPCR法でGADD45α全長をクローニングした。メダカGADD45αはヒト同様4つのエキソンから成り、ヒトとのホモロジーは約80%であった。次に、このGADD45αがメダカで実際に放射線照射後に発現が増大するかどうかを調べた。その結果、ヒト同様照射後数時間で発現が増大すること、また線量依存的に発現が増大することが観察された。これまでのヒトなどの知見で知られている発現に必要不可欠と言われている領域をメダカで予想し、GFPベクターに挿入したいくつかのコンストラクトを作製した。それらコンストラクトをメダカ受精卵にマイクロインジェクションし、5GyのX線を照射し、GFPレポーター遺伝子の発現を観察しているが、これまでのところ顕著にGFPの発現する系統はとられていない。現在新しい別のコンストラクトを作成中である。これらの知見は2005年度の日本動物学会、小型魚類研究会で発表をおこなっている。

が は の purpose, this study body radiation に の な harmful factors such as exposure さ れ た と き に GFP レ ポ ー タ ー posthumous son 伝 を 発 し, リ ア ル タ イ ム に raw き た ま ま そ の influence を お っ て い け る メ ダ カ system を open 発 す る こ と で あ る. Youdaoplaceholder0, alternate 伝 subunit と てGADD45αに focus をさだめ experiment をお をさだめ なった なった. そ の reason は, 1) traces of GADD45 alpha 伝 は, ヒ ト culture cell の で low line amount で の radiation exposure after some time after に は 発 が now raised large す る こ と が confirm さ れ て い る こ と, 2) usually で は ほ と ん ど 発 が now see ら れ な い こ と, 3) ヒ ト な ど の mammals で 発 is planning to write が regulation field detailed analytical さ に れ て い る こ と Youdaoplaceholder0 な が挙げられる. Traces of GADD45 alpha 伝 は son not だ メ ダ カ で は ク ロ ー ニ ン グ さ れ て い な い heritage 伝 son な の で, そ の ク ロ ー ニ ン グ を お こ な っ た. Mammals な ど で take ら れ て い る GADD45 の column を yuan に, メ ダ カ の ゲ ノ ム デ ー タ ー ベ ー ス を 検 rope, メ ダ カ GADD45 alpha の ゲ ノ ム tectonic を to think し, メ ダ カ ゲ ノ ム DNA か ら PCR method で GADD45 alpha span を ク ロ ー ニ ン グ し た. Youdaoplaceholder0 GADD45α ヒト ヒト is the same as 4 エキソ エキソ ら ら to, ヒトと ホモロジ ホモロジ ホモロジ ヒト であった であった であった. に, こ の GADD45 alpha が メ ダ カ で be interstate に after radiation に 発 が now raised large す る か ど う か を adjustable べ た. そ の results, ヒ ト with others in some time after irradiation で 発 が now raised large す る こ と, ま た dose dependent に 発 が now raised large す る こ と が 観 examine さ れ た. こ れ ま で の ヒ ト な ど の know see で ら れ て い る 発 に now need not owe と said わ れ て い る field を メ ダ カ で think し, GFP ベ ク タ ー に scions into し た い く つ か の コ ン ス ト ラ ク ト を cropping し た. そ れ ら コ ン ス ト ラ ク ト を メ ダ カ fertilized egg に マ イ ク ロ イ ン ジ ェ ク シ ョ ン し, 5 gy の X-ray し を exposure, GFP レ ポ ー タ ー posthumous son 伝 の 発 now を 観 examine し て い る が, こ れ ま で の と こ ろ 顕 the に GFP の 発 now す る system は と ら れ て い な い. Now the new コ コ ストラ ストラ トを トを トを is being made into である. Youdaoplaceholder6 れら で chikan れら 2005 で zoological Society of Japan, Small Fish Research society で release list をお をお なって る る る.

项目成果

Genomic organization and developmental expression of globin genes in the medaka, Oryzias latipes.

青鳉、Oryzias latipes 球蛋白基因的基因组组织和发育表达。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Sophia Life Science Bulletin 23
• 作者: Ishikawa Y.;Yamamoto N.;Yoshimoto M.;Yasuda T.;Maruyama K.;Kage T.;Takeda H.;Itou H.;Maruyama K.
• 通讯作者: Maruyama K.

Developmental origin of diencephalic sensory relay nuclei in teleost

硬骨鱼间脑感觉中继核的发育起源

• 发表时间: 2007
• 期刊: Brain, Behav. Evol. 69
• 作者: Wan-Ling Hsu.;et al.;Y. Ishikawa;Y. Ishikawa
• 通讯作者: Y. Ishikawa

An essay : Evolution of medaka globin genes.

一篇文章：青鳉珠蛋白基因的进化。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Sophia Life Science Bulletin 23
• 作者: Iuchi I.;Maruyama K.
• 通讯作者: Maruyama K.