Aufklärung der molekularen Struktur des Photosystems II Höherer Pflanzen an Hand gentechnisch veränderten Tabaks

利用转基因烟草阐明高等植物光系统 II 的分子结构

• 批准号: 5353157
• 负责人: Professorin Dr. Claudia Büchel
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Molekulare Biowissenschaften
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2000-12-31 至 2003-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5353157?language=en
• 关键词: Aufkl; rung; der; molekularen; Struktur

Das Photosystem II (PSII) der Pro- bzw. Eukaryoten weist einige entscheidende Unterschiede auf und während die Struktur von PSII der Prokaryoten mit einer Auflosung von 3.8 Angström bekannt ist, liegen von Eukaryoten nur Daten bis zu ungefähr 8 Angström vor. Die Aufklärung der atomaren Struktur von Proteinkomplexen setzt eine Isolationsmethode voraus, die sowohl eine hohe Reinheit aber auch Intaktheit gewährleistet. In den letzten Jahren hat sich eine gentechnische Methode etabliert, bei der eine Untereinheit eines Komplexes um 6-10 Histidinreste verlängert wird. Dieses His-tag kann dann zur schnellen und selektiven Reinigung verwendet werden. Daher soll versucht werden, eine plastidär kodierte Untereinheit des PSII des Tabaks, CP47, D2 oder alpha-cytb559, mit einem His-tag zu versehen. Aus den so gewonnenen Proteinkomplexen sollen zweidimensionale Kristalle gezüchtet werden, die mit Hilfe von Kryoelektronenmikroskopie untersucht und nach Bildanalyse zur Konstruktion von dreidimensionalen Daten dienen. Die angestrebte Auflösung liegt dabei bei etwa 4 Angström, um einen genauen Vergleich zu der bekannten Struktur der Prokaryoten zu ermöglichen. Die schonendere Isolation erlaubt daneben auch die Nutzung für weitere funktionsanalytische Arbeiten z.B. mittels EPR.

光系统II（PSII）的研究进展.真核生物对原核生物PSII的结构进行了初步的研究，其中3.8 Angström的Auflosuung被认为是真核生物的结构，而真核生物的数据仅为8 Angström。Die Aufklärung der atomaren Struktur von Proteinkomplexen setzt eine Isolationsmethode voraus，die sowohl eine hohe Reinheit aber auch Intaktheit gewährleistet.在过去的几年里，我们制定了一种技术方法，在一个6-10人的组织结构复杂的组织中进行。他的标签可以被擦去，并被选择性地重新写入韦尔登。Daher soll versucht韦尔登，eine plastidär kodierte Untereinheit des PSII des Tabaks，CP 47，D2 oder alpha-cytb 559，mit einem His-tag zu versehen。由于蛋白质复合体解决了二维晶体的韦尔登问题，因此可以使用Kryoelektronenmikroskopie的帮助，并对三维数据结构进行图像分析。该膨胀系数为4埃，是原核生物结构的一个通用标准。Die schonendere Isolation erlaubt daneben auch die Nutzung für weitere funktionsanalytische Arbeiten z.B.电子顺磁共振。