タバコモザイクウイルス複製複合体の構成因子および挙動解析

烟草花叶病毒复制复合体的组成因素及行为分析

• 批准号: 18880016
• 负责人: 川上 茂樹
• 金额: $ 0.95万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18880016/
• 关键词: 複製複合体; 移行タンパク質; TMV; 複製酵素; VRC; 細胞間移行

TMVは感染細胞内でER膜上に移行タンパク質を含んだVirus replication complex (VRC)を形成する.VRCは時間とともに細胞内を移動し,最終的には原形質連絡を経由しで隣接細胞へと移行して行くことを以前に報告した.しかし,複製酵素が直接細胞間移行しているという報告はまだない.そこで我々は移行タンパク質非存在下における複製酵素の細胞間内および細胞間移行能の有無を明らかにするため,坑ウイルスタンパク質抗体を用いた免疫沈降法でウイルス移行タンパク質を主とするウイルス移行型複合体とウイルス複製酵素を主とするウイルス複製複合体が同一のものであるか調べている。今年度、3D画像解析法により感染後16時間以降に複製酵素と移行タンパク質が感染細胞内で密接に相互作用することを示した.また、温度感受性変異株TMV-Lsl(Lsl)は低温条件下では正常に細胞間移行を行えるが、高温条件下(28度以上)では移行型複製複合体を形成できず、結果として細胞間移行を行えないことを明らかにした.高温条件下のLsl複製複合体には、野生株のTMVに比べて含有される移行タンパク質の量が著しく低く抑えられていたのである.現在は免疫沈降法で経時的に精製した複製複合体や移行タンパク質複合体を,エキシマレーザー顕微鏡を用いて直接葉の上皮細胞へ導入を試み、ウイルスタンパク質複合体そのものに感染性があるか調べている.今後は、本研究を通じて移行タンパク質が細胞間移行および複製に果たす役割を明らかにしたい。

TMV infection intracellular cell ER membrane transfer cell contains cell Virus replication complex (VRC) cell to form a VRC cell, and the most advanced one is transferred from cell phone to cell phone and transferred to previous reports. Direct intercellular transfer of enzymes from one another to another. The report reports are sensitive. In the presence of non-existent transfer enzymes, we can transfer between cells in the cell and between cells in which there is no known gene transfer. The immunoprecipitation method was used to detect the antibody. The antibody was detected by immunoprecipitation method. The main enzyme was replicase. This year, 3D image analysis was performed 16 hours after infection. The enzyme was transferred to infect cells, and the intracellular tight-link interaction assay was used to detect the effect. Temperature sensitive strain TMV-Lsl (Lsl) migrates between normal cells at low temperature and replicates at high temperature (above 28 degrees Celsius). The results show that the transfer between cells is clear. Under the condition of high temperature, Lsl replicates and wild plants TMV contain more potency than that of wild plants. Now, during the immunoprecipitation method, the sperm was copied and transferred to the syncytis. the epithelial cells were inserted directly into the cells, and the cells were inserted into the body directly. The cells were not infected. In the future, in this study, the transfer between cells was replicated and the results were analyzed.

项目成果

YAC Protocols Second Edition Edited

YAC 协议第二版编辑

• 发表时间: 2006
• 作者: S.Kawakami;S.Harashima;A.Kobayashi;K.Fukui
• 通讯作者: K.Fukui

Transformation of yeast using bioactive beads with surface-immobilized yeast artificial chromosomes

使用表面固定酵母人工染色体的生物活性珠转化酵母

• 发表时间: 2006
• 期刊: Methods Mol Biol. 349
• 作者: Kawakami S;Harashima S;Kobayashi A;Fukui K
• 通讯作者: Fukui K

TMVの複製酵素と移行タンパク質の相互作用の解析

TMV复制酶与易位蛋白相互作用分析

• 发表时间: 2007
• 作者: 川上茂樹、平尾壽啓、馬場明子、堤雅史、小林昭雄、RogerN. Beachy;渡辺雄一郎
• 通讯作者: 渡辺雄一郎

Domains of tobacco mosaic virus movement protein essential for its membrane association

• DOI: 10.1099/vir.0.81936-0
• 发表时间: 2006-09-01
• 期刊: JOURNAL OF GENERAL VIROLOGY
• 影响因子: 3.8
• 作者: Fujiki, Masaaki;Kawakami, Shigeki;Beachy, Roger N.
• 通讯作者: Beachy, Roger N.

Improvement of Transformation Efficiency by Bioactive-Beads-Mediated Gene Transfer Using DNA-Lipofectin Complex as Entrapped Genetic Material

使用 DNA-Lipofectin 复合物作为捕获的遗传物质通过生物活性珠介导的基因转移提高转化效率

• 发表时间: 2008
• 期刊: Journal of Bioscience and Bioengineering 105
• 作者: Tomoko Murakawa;Shin'ichiro Kajiyama;Tomohiko Ikeuchi;Shigeki Kawakami and Kiichi Fukui
• 通讯作者: Shigeki Kawakami and Kiichi Fukui