ウイルスの細胞間移行機構の解明-移行タンパク質の分解系の解析-

阐明病毒细胞间转移机制-转移蛋白降解系统分析-

• 批准号: 00J08144
• 负责人: 川上 茂樹
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J08144/
• 关键词: タバコモザイクウイルス; 細胞間移行; 移行タンパク質

植物ウイルスの移行タンパク質(movement protein ; MP)は原形質連絡(plasmodesmata ; PD)を介してウイルスゲノムを感染細胞から非感染細胞へ伝播する役割を担っていると考えられている。しかし、そのウイルスの移行機構については詳細な解析がなされていない。そこで私はウイルスのコードするMPが宿主細胞内で翻訳後修飾を受けタンパク自身の安定性や局在性を変化させていることに着目し様々なアプローチを試み新規の成果が得られた。先ずMPは他のウイルスタンパク質である複製酵素タンパク質や外皮タンパク質と比べて安定性の低いタンパク質であり、その分解は二つの翻訳後修飾すなわちMPのリン酸化が間接的に安定をもたらし、直接的にはMPのユビキチン化によるユビキチン-プロテオソーム系で行われていることが近年報告された。そこで私はMPのユビキチンサイトの決定を試みた。MPはリン酸化を受けて安定化することからMPのリン酸化サイト・37セリン残基の近傍にユビキチンサイトがあると予想しMPの欠失変異体を作成し解析を行ったところ34,38そして41番目のいずれかのリシン残基がユビキチンのターゲットサイトであることが分かった。また、この近傍への修飾によりタンパク質の局在が決定されていることも明らかにした。また、マルチホトン・共焦点顕微鏡を用いたtime-lap解析により感染細胞におけるウイルスの細胞間移行機構を明らかにした。ウイルスは先ず始めに小胞体(ER)の膜の上にウイルス核酸とMPからなる複合体を感染中期(14hpi)までに確立しアクトミオシン運動系により細胞内を移動し細胞の表面に移行した。その後ゆっくりと細胞膜上を移行してPDに到達する。PDに到達したウイルス複合体はゆっくり時間を懸けてPDを押し広げながら隣接細胞へ通り抜けウイルスの細胞間移行を感染後期(18hpi)に確立していることを明らかにした。ウイルスの感染過程をリアルタイムで観察を行ないウイルスの動的機構を明らかにしたのは新規の発見である。

The migration protein (MP) of plant cells is related to plasmodesmata (PD), which is the medium of infection and non-infection. For example, if you want to use a mobile device, you can use it to analyze it in detail. The results of the experiment were obtained by modifying the stability of the host cell and the host cell. In recent years, it has been reported that the replication enzyme of MP has been used for the analysis of its quality, stability, and decomposition, and post-modification of MP. The decision of the MP is made on the basis of the following criteria: The MP protein was stabilized by the reaction of the MP protein with the 37-mer residue. The MP protein was analyzed by the reaction of the 34-mer residue with the 41-mer residue with the 37-mer residue. The quality of the product is determined by the quality of the product. Confocal microscopy is used for time-lap analysis of infected cells. In the early stages of infection, the cellular membrane of the ER was transformed into the cellular membrane of the MP complex, which was established at the middle stage of infection (14hpi). In the middle stage of infection, the cellular membrane was transformed into the cellular membrane of the ER. The cell membrane of the cell is transferred to the cell membrane. The time for PD to arrive at the complex was suspended. PD was established at the late stage of infection (18hpi). The infection process of Iris can be observed from a variety of sources, and the institutions that carry out Iris activities will be clear and clear, and there will be new regulations and insights.

项目成果

Kawakami et al.: "Defective Tobamovirus Movement Protein Lacking Wild-Type Phosphorylation Sites Can Be Complemented by Substitutions Found in Revertants"J.Virol. 77. 1452-1461 (2003)

Kawakami 等人：“缺乏野生型磷酸化位点的有缺陷的烟草病毒运动蛋白可以通过在回复体中发现的取代来补充”J.Virol。