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結核菌を含むマイコバクテリアの細胞壁合成に関わるタンパク質の構造と機能の解析

结核分枝杆菌等分枝杆菌细胞壁合成相关蛋白的结构和功能分析

基本信息

批准号：
18880041
负责人：
森茂太郎
金额：
$ 1.75万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

結核菌を含むマイコバクテリアが有している特徴的な厚い細胞壁構造の形成に関与しているタンパク質について、その機能と構造の解析を目的として種々の研究を行った。細胞壁構造の主要な脂質成分であるミコール酸の生合成に関与している2種類の結核菌由来酵素、Propionyl-CoA carboxylaseとAcyl-CoA synthetaseについて、大腸菌を宿主とした大量発現株を構築してSDS-PAGE上で単一バンドになるまで精製した。精製酵素を用い結晶化条件のスクリーニングを行い、得られた結晶を用いて放射光施設での回折データの収集を試みた。また、細菌の細胞壁構造には無機リン酸の重合体であるポリリン酸が関与しているとの報告例があることから、結核菌においてもポリリン酸と細胞壁構造との関連が予想された。そこでポリリン酸合成酵素である結核菌由来ポリリン酸キナーゼについて、大腸菌を宿主とした大量発現株を構築してSDS-PAGE上で単一バンドになるまで精製を行い、その詳細な酵素学的諸性質を明らかにした。その結果、結核菌由来ポリリン酸キナーゼは、溶液中では活性を保持している状態として6量体を形成していた。また、本酵素はATPを基質としてポリリン酸を合成する反応とその逆反応であるポリリン酸とADPを基質としてATPを合成する反応を触媒するが、速度論的解析からATPよりもADPに対する親和性の方が高いことが示された。両反応ともに、2価の金属イオンが活性の発現には必須であり、その濃度には至適濃度が存在していた。これらの研究結果より、結核菌の細胞壁構造に関与しているタンパク質の機能と構造の一端について明らかにすることができた。

Results Rhizoctonia sclerotiorum was used to analyze the thick cell walls of heavy oysters with special characteristics to form the cell wall, to form the cell wall and to analyze it. The main components of the cell wall, such as Propionyl-CoA carboxylase, Propionyl-CoA carboxylase, Acyl-CoA synthetase, and mycelium, are made up of enzymes, Rhizoctonia spp., host cells, and bacteria. There are a large number of isolates in SDS-PAGE. The seminal enzyme was crystallized under the conditions of crystallization, and the results were analyzed. The results were analyzed by the photoluminescence method. The cell walls of bacteria and bacteria were used in the same way as those of bacteria, bacteria and bacteria. The origin of Rhizoctonia sclerotiorum, the host of Agrobacterium tumefaciens, the host of Artemisia mandshurica and the host of Artemisia mandshurica were detected on the SDS-PAGE. The results showed that there was no significant difference between the two groups. The results of the test, the origin of the sclerotium bacteria, the acid acid and the activity of the bacteria in the solution were maintained and the body weight was measured. The enzyme, ATP, ADP, acid, ATP, ADP, acid, catalyst, acid, acid It is necessary to change the temperature, the temperature of the metal, the temperature of the metal, the temperature, the temperature and the temperature. The results of the study, the structure of the cell wall of Sclerotinia sclerotiorum and the structure of the cell wall of Sclerotinia sclerotiorum can be used to make one end of the machine.