ゼブラフィッシュ神経系におけるシナプス形成の分子細胞生物学的解析

斑马鱼神经系统突触形成的分子和细胞生物学分析

• 批准号: 06F06573
• 负责人: 岡本 仁
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06F06573/
• 关键词: シナプス形成; ゼブラフィッシュ; 神経軸索分岐; 樹状突起; 神経; 網膜; 視蓋; 力学; 視神経; 蛍光蛋白; Rab3a; シナプス; イメージング

1)カスパーゼファミリーが神経軸索・樹上突起の分岐・シナプス形成促進因子であるかどうかの検討カスパーゼファミリーが神経軸索・樹上突起の分岐・シナプス形成促進因子であるかどうかを調べるために、Caspase3が、ゼブラフィッシュの網膜神経節細胞の軸索が枝分かれし、シナプス形成を行っている時に発現することを確認した。さらに、Caspase3は視蓋にも発現することを確認した。Caspase3の切断と、軸索分岐との関わりを調べるために、タンパク切断によって活性化されたCaspase3のみを認識する抗体を使って、視神経を染色した。その結果、活性化されたCaspase3が神経節細胞の軸索に存在していることを示した。Caspase3が、成長円錐の縮退に関わっている可能性を調べるために、Caspase3の抑制因子を投与すると、軸索縮退因子であるlysophoshpatidic acidによって誘発される成長円錐の縮退が妨げられることが示され、Caspase3が成長円錐における走化性反応の制御に関わっていることが明らかになった。2)生きた胚の中でシナプスの形成過程を観察するシステムの確立我々は既に、Brn3aの発現制御因子のもとで、Gal4-VP16を、網膜神経節細胞と、視蓋の出力神経細胞で発現できるプラスミドベクターと、これをゲノムに組込んだトランスジェニック系統を確立している。UASの下流で、YFP-Rab3aやPSD95-GFPを発現するプラスミドとを共注入することで、YFP-Rab3aを網膜神経節細胞で、PSD95-GFPを視蓋神経細胞で発現させることによって、シナプス形成に関わる神経細胞の軸索や樹上突起の分岐の動的様相を生きた胚の中で観察する実験系を確立した。

1）检查caspase家族是否是神经元轴突和树突过程的启动子，以研究caspase家族是否是神经元轴突和树突状过程的启动子，我们证实caspase3是当Zebrafish分支和突触形成的视网膜神经节细胞的轴突时表达。此外，已经证实CASPASE3也在tectum中表达。为了研究caspase3裂解和轴突分支的参与，用抗体染色了视神经，该抗体仅识别蛋白质裂解激活的caspase3。结果表明，神经节细胞的轴突中存在活化的caspase3。为了研究CASPASE3参与生长锥变性的可能性，施用CASPASE3抑制剂的抑制剂可防止轴突变性因子诱导的生长锥变性，即溶血磷酸，从而揭示了Caspase3参与生长锥中趋化性反应的控制。 2）建立一个用于观察生物胚胎中突触形成的系统，我们已经建立了一个转基因线，其中gal4-vp16可以在视网膜神经节细胞和tectum的神经元中表达，而质粒载体可以在BRN3A的表达调节剂中表达。 UAS的下游，我们建立了一个实验系统，其中YFP-RAB3A和PSD95-GFP与在视网膜神经节细胞中表达YFP-RAB3A的质粒共同注射，在视网膜神经节细胞和构造神经元中的PSD95-GFP中，我们观察到了神经元轴突和活性轴突的动态构造，涉及Cynendritirit cynendritrit cynendrist indendendendendendendendendendendendendendendendendenendendendendendendendendendendendendendendendendendendendendendendency进行着注入。

项目成果

The Ubiquitin-Proteasome System In Nervous System Development In The Ubiquitin Proteasome System in the Central Nervous System: From Physiology To Pathology.

神经系统中的泛素蛋白酶体系统 中枢神经系统中的泛素蛋白酶体系统：从生理学到病理学。

• 发表时间: 2007
• 作者: Campbell;D. S.
• 通讯作者: D. S.