中脳・小脳形成における組織間相互作用とIslet-3

中脑和小脑形成中的组织间相互作用和 Islet-3

• 批准号: 10171240
• 负责人: 岡本 仁
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10171240/
• 关键词: ゼブラフィッシュ; ホメオドメイン蛋白; Islet-3; 中脳分化; 中脳後脳境界部; サブトラクション; ディファレンシャルディスプレー; 小脳分化

1:サブトラクション法による中脳および中脳後脳境界部形成因子の探索正常胚及びLIM過剰発現胚の頭部(中脳後脳境界部及びそれより前方部)よりRNAを調製し、cDNAのサブトラクションを行った。サブトラクションで得られた約2000クローンについてデイファレンシャルハイブリダイゼーションを行い、目や視蓋原基、中脳後脳境界部などに特異的に発現しているクローンを10個得た。この内で視蓋原基や中脳後脳境界部に発現するものは3クローン得られた。一つは317アミノ酸からなるタンパク質をコードする新規遺伝子である(クローン#533)。Islet-3のLIMドメインを過剰発現することによって、中脳後脳境界部の形成に必要な遺伝子pax2、eng2、wntlの発現が受精後約14時間目あたりから減少し始めることが知られている。クローン#533はLIM過剰発現胚の中脳後脳境界部では受精後14時間目で既に発現がみられない。これらのことからクローン#533はIsIet-3によるpax2、eng2、Wmlの発現調節に深く関与する分子である可能性がある。2:Differential Disρlay法による検索我々は現在、サブトラクションに相補的な方法としてDifferentialDisplay法を用いて、Isle-3の下流因子を検索している。正常胚とIslet-3のLIM領域を過剰発現する胚の、中脳および中脳後脳境界部から単離したtotalRNAを出発材料として、DiffcrcntialDisplay法によって合計約26,000本のバンドを比較したところ、172本のバンドが、LIM過剰発現胚において現弱しており、124本のバンドが増強していた。現在これらのバンドを単離し、各々に対応するmRNAの発現パターンを解析中である。

1：从正常胚胎的头部和LIM过表达的胚胎（中脑边界和前部部分）和cDNA搜索通过减法RNA的中脑和后脑边界的形成。通过减法获得的大约2,000个克隆直接杂交，并在眼睛，胸骨原始原则和中脑后脑边界中特异性表达了10个克隆。其中，获得了三个克隆，这些克隆在塑性原始和后脑中脑的边界上表达。一种是一种编码由317个氨基酸组成的蛋白质的新型基因（克隆＃533）。众所周知，过表达Islet-3的LIM结构域开始降低PAX2，ENG2和WNTL基因的表达，这对于在受精后大约14小时形成了中脑后后脑边界所必需的。克隆＃533不再在胚胎过表达LIM的中脑后脑边界上表达。受精后14小时。从这些原因中，克隆＃533可能是Isiet-3对PAX2，ENG2和WML表达的调节的分子。 2：通过差分扰动搜索ρlay，我们目前正在使用差异化方法作为减法方法来搜索Isle-3的下游因子。使用DiffrcntiaLdisplay方法比较了大约26,000个频段，该方法使用从中脑和中脑的后脑后脑边界分离出的胚胎的胚胎的边界，过表达正常胚胎的LIM区域和胚胎过表达Islet-3的LIM区域，并使用diffrcntiaLdisplay方法和172个带的embry ins Embry and Embry ins Embry and Embry and Embry ins Embry in and Embry in and Embry in and 172。这些频段目前正在分离，并且正在分析每个相应mRNA的表达模式。

项目成果

Kikuchi, Y., Segawa, H., Tokumoto, M., Hotta, Y., Uyemura, K., and Okamoto, H.: "Islet-3 in the regional specification of the brain." pp108-114 in Neural Development Uyemura, K., Kawamura, K., Yazaki, T., eds., Springer.108-114 (1998)

Kikuchi, Y.、Sekawa, H.、Tokumoto, M.、Hotta, Y.、Uyemura, K. 和 Okamoto, H.：“大脑区域规范中的 Islet-3”。

Higashijima, S., Okamoto, H., Ueno, N., Hotta, Y., and Eguchi, G.: "High-frequency generation of transgenic zebrafish which reliably express GFP in whole muscles or the whole body by using prooter of zebrafish origin." Developmental Biology. 192. 289-299

Higashijima, S.、Okamoto, H.、Ueno, N.、Hotta, Y. 和 Eguchi, G.：“通过使用斑马鱼的启动子，高频生成在整个肌肉或整个身体中可靠表达 GFP 的转基因斑马鱼

岡本 仁: "ゼブラフィッシュのHox遺伝子から見た脊椎運動の進化と多様化" 生体の科学. 49. 546-554 (1998)

Hitoshi Okamoto：“从斑马鱼的 Hox 基因看出脊柱运动的进化和多样化”生物科学 49. 546-554 (1998)。