ゼブラフィッシュGal4エンハンサートラップ法の開発とその器官形成研究への応用

斑马鱼Gal4增强子捕获方法的建立及其在器官发生研究中的应用

• 批准号: 06J01615
• 负责人: 浅川 和秀
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J01615/
• 关键词: Gal4; UAS; ゼブラフィッシュ; 後脳; 介在神経; 逃避行動; 神経機能; Tetanus toxin; エンハンサートラップ; 器官形成; 行動異常; Ga14

(1)Gal4トラップ法を用いて単離したhspGFF62A系統は、破傷風神経毒素を発現させると振動刺激に対する逃避行動に特に顕著な欠損を示すことを見いだした。およそ50%のhspGFF62A;UAS:TeTxLC二重トランスジェニック幼魚は、振動刺激に対する逃避行動に特徴的な速いターンとそれに伴う速いスイミングを示さなかった。(2)hspGFF62A系統のGal4発現細胞を、UAS:GFPレポーター系統と掛け合わせることで可視化した。hspGFF62A;UAS:GFP二重トランスジェニック幼魚においては、振動刺激を感知する側線感覚器官と、逃避行動に関与するマウスナー細胞がGFPによって染色された。側線とマウスナー細胞はシナプスを形成することが知られているが、これらの結果は、側線とマウスナー細胞を介した経路が振動刺激に対する速いターンとそれに伴う速いスイミングに重要な役割を果たしていることを示唆している。(3)後脳の介在神経を含む領域にGal4を発現するhspGGFF27A系統をGal4エンハンサートラップスクリーニングによって単離した。hspGGFF27A系統とUAS:TeTxLC系統を交配させ、後脳の介在神経を含む領域に破傷風神経毒素を発現させると、受精後48時間以降の胚、幼魚の運動は完全に抑えられた。(4)後脳による運動の制御の開始についてより詳細に解析するために、後脳にGal4を発現し、なおかつ脊髄ニューロンで全くGal4を発現しない系統g104Aとg266Aを単離した。(5)g104A系統とUAS:TeTxLC系統を交配させ、後脳に特異的に破傷風神経毒素を発現させると、受精後48時間の胚の逃避行動に異常を確認した。この結果は、受精後48時間において脳を介した逃避行動の制御が行なわれていることを示している。

(1) The Gal4 method is used to isolate hspGFF 62A from tetanus toxin, to avoid vibration stimulation, to avoid damage, and to detect damage. 50% hspGFF 62A;UAS:TeTxLC dual mode fish response, vibration stimulus response to escape behavior characteristics of the speed of the middle mode and the speed of the middle mode. (2) Gal4 cells of hspGFF62A system were visualized. hspGFF62A;UAS:GFP duplex cells are stained with green light and green light. The result is that the cells are stimulated by vibration. (3)After the introduction of the Gal4, the hspGGFF 27A system was developed. hspGGFF27A system and UAS:TeTxLC system are used to detect tetanus neurotoxin in the nervous system after mating and post-fertilization, and to completely inhibit embryo and juvenile movement after 48 hours of fertilization. (4)After the start of the movement control, the detailed analysis of the Gal 4 appeared, the G104 appeared, the G266 appeared, the Gal4 appeared, the G104 appeared, the G266 appeared, the Gal4 appeared, the G266 appeared, the Gal4 appeared, the G104 appeared, the Gal4 appeared, the G266 appeared, the Gal 4 appeared. (5) g104A system and UAS:TeTxLC system were identified for mating, post-fertilization specific tetanus neurotoxin detection, and embryo escape at 48 hours post-fertilization. The result is that 48 hours after fertilization, the escape action is controlled.

项目成果

A novel conserved evxl enhancer links spinal interneuron morphology and cis-regulation from fish to mammals

一种新型保守的evxl增强子将鱼类和哺乳动物的脊髓中间神经元形态和顺式调节联系起来

• 发表时间: 2009
• 期刊: Developmental Biology 325
• 作者: Suster;ML.
• 通讯作者: ML.

Targeted Gene Expression by Tol2 Transposon-mediated Gal4 Gene and Enhancer Trap Approaches in Zebrafish

Tol2 转座子介导的 Gal4 基因和增强子陷阱方法在斑马鱼中的靶向基因表达

• 发表时间: 2008
• 作者: Asakawa;K.
• 通讯作者: K.

Targeting neural circuitry in zebrafish using GAL4 enhancer trapping

• DOI: 10.1038/nmeth1033
• 发表时间: 2007-04-01
• 期刊: NATURE METHODS
• 影响因子: 48
• 作者: Scott, Ethan K.;Mason, Lindsay;Baier, Herwig
• 通讯作者: Baier, Herwig

Efficient transposition of the Tol2 transposable element from a single-copy donor in zebrafish

• DOI: 10.1073/pnas.0810380105
• 发表时间: 2008-12-16
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Urasaki, Akihiro;Asakawa, Kazuhide;Kawakami, Koichi
• 通讯作者: Kawakami, Koichi

The Tol2-mediated Gal4-UAS method for gene and enhancer trapping in zebrafish.

• DOI: 10.1016/j.ymeth.2009.01.004
• 发表时间: 2009-11
• 期刊: METHODS
• 影响因子: 4.8
• 作者: Asakawa, Kazuhide;Kawakami, Koichi
• 通讯作者: Kawakami, Koichi