トランスジェニック・センサーマウスを用いた環境パトロースシステムの構築

1.トランスジェニック・センサーマウスの特性の解析昨年度、ダイオキシン類検出のためのトランズジェニックマウスの樹立に成功した。そのセンサーマウスは、センサー配列DRE(ダイオキシン応答配列)の下流にレポータータンパク質SEAPをコードする遺伝子が組み込まれている。即ち、センサーマウスがダイオキシン類に曝露されると血中にSEAPが分泌される。血中のSEAPの値は血清5μlから測定することができるので、尻尾から10-20μlを採血するだけで検査が可能である。特性の解析のため、詳細なダイオキシン投与実験を行なった。具体的には、センサーマウスにダイオキシン(2,3,7,8-TCDD)を強制経口投与し、その後経時的に採血を行い、血中のSEAP活性を測定した。昨年度報告したAhR活性化の経時変化や検出限界のほか、検出感度に性差があることが確認され、メスよりもオスのほうが高感度であることが明らかとなった。さらに、体内のどの臓器でAhRが活性化されているかを明らかにするため、ダイオキシン投与後に臓器を摘出し、各臓器中のSEAPのmRNAをRT-PCRによって解析した。その結果、投与3日後には肝臓においてSEAPの発現が認められ、個体差はあるものの、3週間後には肺や肝臓においてもその発現が確認できた。2.センサーマウスを用いた実験的喫煙室における有害物質のモニタリング作成したセンサーマウスにタバコ煙を受動的、能動的に吸入させて、血中のSEAP活性を検討したところ、どちらも血中SEAPの有意な上昇が観察された。次に、よりヒトの曝露状況に近い環境での検討を行うため、実験的な喫煙室を作成した。これを用いて、1日3時間のタバコ曝露と21時間の通常飼育というサイクルの実験を繰り返し4日間行い、この実験においても血中SEAPの上昇が認められた。タバコ煙曝露によって上昇したSEAPがどの臓器で発現されたかを検討するため、臓器中のSEAPのmRNAをRT-PCRによって測定した。その結果、肺で有意な発現上昇が認められたほか、直接煙に曝露されない肝臓でも発現の上昇が認められた。

1.トランスジェニック・センサーマウスの特性の解析昨年度、ダイオキシン類検出のためのトランズジェニックマウスの樹立に成功した。そのセンサーマウスは、センサー配列DRE(ダイオキシン応答配列)の下流にレポータータンパク質SEAPをコードする遺伝子が組み込まれている。即ち、センサーマウスがダイオキシン類に曝露されると血中にSEAPが分泌される。血中のSEAPの値は血清5μlから測定することができるので、尻尾から10-20μlを採血するだけで検査が可能である。特性の解析のため、詳細なダイオキシン投与実験を行なった。具体的には、センサーマウスにダイオキシン(2,3,7,8-TCDD)を強制経口投与し、その後経時的に採血を行い、血中のSEAP活性を測定した。昨年度報告したAhR活性化の経時変化や検出限界のほか、検出感度に性差があることが確認され、メスよりもオスのほうが高感度であることが明らかとなった。さらに、体内のどの臓器でAhRが活性化されているかを明らかにするため、ダイオキシン投与後に臓器を摘出し、各臓器中のSEAPのmRNAをRT-PCRによって解析した。その結果、投与3日後には肝臓においてSEAPの発現が認められ、個体差はあるものの、3週間後には肺や肝臓においてもその発現が確認できた。2.センサーマウスを用いた実験的喫煙室における有害物質のモニタリング作成したセンサーマウスにタバコ煙を受動的、能動的に吸入させて、血中のSEAP活性を検討したところ、どちらも血中SEAPの有意な上昇が観察された。次に、よりヒトの曝露状況に近い環境での検討を行うため、実験的な喫煙室を作成した。これを用いて、1日3時間のタバコ曝露と21時間の通常飼育というサイクルの実験を繰り返し4日間行い、この実験においても血中SEAPの上昇が認められた。タバコ煙曝露によって上昇したSEAPがどの臓器で発現されたかを検討するため、臓器中のSEAPのmRNAをRT-PCRによって測定した。その結果、肺で有意な発現上昇が認められたほか、直接煙に曝露されない肝臓でも発現の上昇が認められた。