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TetシステムによるES細胞由来心筋細胞の作成と心筋梗塞巣への応用に関する研究

利用Tet系统构建ES细胞来源的心肌细胞及其在心肌梗死病变中的应用研究

基本信息

批准号：
06J08454
负责人：
武居俊輔
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J08454/
关键词：
ES細胞心筋細胞分化誘導

项目摘要

ヒトES細胞由来の心筋細胞は心疾患の治療において、細胞ソースとして直接的で潜在的な可能性を持っている。この研究ではTetシステムを効率よく機能させるための基盤技術としてbone morphogenetic protein(BMP)-4を用いた新しい分化誘導法の確立を試みた。FBS(牛胎児血清)の条件検討の結果、20%FBSによる4日間の浮遊培養が心筋細胞の分化のためには最適であるということが分かった。さらにBMPのアンタゴニストであるNogginの添加により、拍動EBの発生率が23.6%から5.3%まで低下した。このことは通常に見られる心筋細胞分化にBMPシグナリングが深く関与していることを示している。そこで様々な濃度のBMP-4を添加しその効果を検証した結果、4日間の浮遊培養の間12.5-25ng/mlのBMP-4を添加する処置がもっとも効率よく心筋細胞分化を促進した。BMP-4 25ng/ml添加の拍動EB発生率は、接着後6日目において95.8%に達した。EB形成過程のreal-time PCR解析により、25ng/mlのBMP-4による処置は心筋細胞関連遺伝子であるMesp1とNkx2.5の発現を有意に上昇させることが分かった。誘導された心筋細胞は心筋細胞タンパク質であるatrial natriuretic peptide(ANP),cardiac troponin I(cTnI)の発現は時間の経過とともに増加し、心筋細胞の成熟が示唆された。さらに免疫染色によりこれらの心筋細胞にカドヘリンとコネキシン43の発現が確認され、細胞間構造が適切に形成されていることが明らかになった。これらのことからBMP-4の濃度および添加すべき時期は、ヒト胚性幹細胞から心筋細胞へ効果的に誘導を行うために決定的に重要なファクターであることが明らかになった。同時にBMP-4とFBSを組み合わせることでヒトES細胞から心筋細胞への分化を有意に促進するための誘導法を確立できた。

The origin of the ES cell, the heart disease, the treatment of heart disease, the direct potential possibility, the treatment of heart disease, the direct potential possibility. In this paper, we use the new Tet differentiation method to make sure that the pilot test is established through the study of the basic technical training bone morphogenetic protein (BMP)-4 on the basis of the research results. The results of FBS (bovine fetal serum) conditional test, 20%FBS culture and differentiation of heart cells within 4 days. The rate of birth in Noggin is 23.6%, 5.3% and 5.3%, respectively. The number of children born in Noggin is 23.6% and 5.3%, respectively. In general, the cells of the heart are divided into two parts: the BMP and the deep. The results of the test results, the addition of 12. 5-25ng/ ml BMP-4-4 in 4 days and the increase in the rate of cell differentiation in 4 days promote the differentiation of heart cells. BMP-4 25ng/ml added "beat EB birth rate", and then reported 95.8% birth rate in the next 6 days. The formation of EB through real-time PCR analysis, 25ng/ mlBMP-4 and Mesp1 Nkx2.5 have shown that you are interested in making sure that you do not want to pay attention. Direct your mind to pay attention to your atrial natriuretic peptide (ANP), and cardiac troponin I (cTnI) to show that your time has increased and your heart has matured. Immuno-staining was used to determine the number of cells in the heart, and the recognition was confirmed in 43% of the time, and the temperature was detected by intercellular immunostaining. Please tell the BMP-4 to add the important information that is determined by the leader of the current time period and embryogenic cell cycle. At the same time, it is intended to promote the establishment of ES cells by means of the BMP-4 FBS system, which is intended to promote the differentiation of heart cells.