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心筋細胞の分化に関わる遺伝子の同定と分化誘導への応用

心肌细胞分化相关基因的鉴定及其在分化诱导中的应用

基本信息

批准号：
15790404
负责人：
尾野亘
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Department of Clinical Research, National Hospital Organization Kyoto Medical Center (2004)National Cardiovascular Center Research Institute (2003)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

心筋細胞の早期マーカーであるNkx2.5遺伝子座にGFPをノックインしたマウスES細胞株に対して我々の作成したポリAトラップレトロウイルスベクターを用いて遺伝子を破壊した。分化誘導後GFPを発現しない細胞クローン、すなわち心筋細胞への分化効率が減少するクローンを選別した。このレトロウイルスベクターのLTRにはloxP配列を挿入しているので、Cre recombinaseを発現させることで、挿入されたレトロウイルス遺伝子を除去した後にGFPの発現が再上昇するクローンをさらに選別した。その後、薬剤耐性遺伝子とポリA配列から作成したプライマーを用いて3'RACE法を行うことにより、挿入変異を受けた遺伝子を同定した。現在48個の遺伝子について、その上流、下流の遺伝子を含めて詳細な検討を続けている。そのうちの1つであるtryptophan hydroxylase 1(TPH1)においては、ノックアクトマウスにおいて拡張型心筋症様の心筋病変が生じることが報告されている。しかしながら、そのような病変を呈しないノックアウトマウスの系統もあり、神経系で発現の認められるTPH2が代償的な役割を果たしている可能性もある。現在、後者のノックアウトマウスの分与を受け、TPH1の役割について検討を始めた。一方、マウスES細胞で胚葉体形成後6日目にヒストン脱アセチル化酵素阻害薬トリコスタチンAで刺激すると、心筋細胞分化効率は約4%から8%へと有意に増加した。さらに上記で得られた遺伝子の過剰発現とトリコスタチンAの刺激で心筋細胞分化効率が上がるかどうかについても検討中である。また、白色脂肪細胞から分離されるstromal vascular fractionには間葉系の幹細胞が含まれる。この幹細胞からの血管系への分化効率についても上記の実験で得られた遺伝子をもとに検討している。

Early cardiac muscle cells The に対して我々の成したポリAトラップレトロウイルスベクターを用いて伝子を棊した. After differentiation induction, the differentiation efficiency of GFP cells and cardiac muscle cells was reduced, and the differentiation efficiency was reduced. Cre recombinaseを発appearsさせることで、insertsされたレトロウイルス remain伝子をAfter removing the した, the GFPの発appears and then rises again.その后、薬艤patience legacy 伝子とポリA arrangement から成したプライマーを用いて3'RACE method を行うことにより, insert 変different をReceive けた缝子を同定した. There are currently 48 の伝子について, その上上, 下的人伝子を contain めて in detail な検问を続けている.そのうちの1つであるtryptophan hydroxylase 1(TPH1)においては、ノックアクトマウスにおいて拡Tension type heart disease様のcardiotrophy 変が生じることがreportされている.しかしながら、そのような disease変を成しないノックアウトマウスのsystem もあり、神The possibility of TPH2 compensating for TPH2's compensation is too high. Now, the latter's のノックアウトマウスの分和をReceived け, TPH1's servicing cut について検検撒开めた. On the one hand, 6 days after the embryonic body formation of Masakusa ES cells, the enzyme that deactivates the enzyme blocks the enzyme. The stimulation and cardiomyocyte differentiation efficiency of コスタチンA are about 4% and 8%, respectively.さらに上记で得られた伝子のpass剰発现とトリコスタチンAのthorn The differentiation efficiency of cardiomyocytes is improved by improving the efficiency of cardiomyocyte differentiation.また、White fat cells からIsolation されるstromal vascular fractionにはMesenchymal system のstem cells がcontaining まれる.このStem cells からのvascular system へのdifferentiation efficiency についても上记の実験でget られた伝子をもとに検 Discussion している.