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チロシンリン酸化酵素c-Ab1の機能解析

酪氨酸激酶c-Ab1的功能分析

基本信息

批准号：
06J08815
负责人：
鈴木淳
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto University (2007)Osaka University (2006)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J08815/
关键词：
c-Ab1 Abi-1 Mena CHO細胞 actin c-Abl リン酸化 GFP GST セルソーター

项目摘要

我々はこれまで、精製タンパク質を用いてin vitroでリン酸化反応の再構築を行うことを考え、哺乳類細胞で、浮遊培養が可能なCHO-S細胞を用いたタンパク質発現システムを構築した。このシステムは、レトロウイルスレセプターを発現させたCHO-S細胞に、目的遺伝子を組み込んだレトロウイルスを感染させ、マーカーとして用いたGFP高発現細胞をセルソーターにより選択することで、目的タンパク質安定高発現細胞を迅速かつ簡便に取得できるのが特徴である。現在このシステムを用いて、c-Ab1、Abi-1、Menaが発現精製できることは確認済みである。Menaに関しては、更にゲルろ過、イオン交換カラムを組み合わせることで精製度を上げ、4量体として精製されることが分かった。この精製タンパク質を、YFP-actinを発現させた細胞にマイクロインジェクトしイメージングを行ったところ、actinが葉状仮足様の構造状の部位に集積したことから、機能タンパク質として精製されていることも確認できた。以上の結果より、新規「タンパク質発現系」を構築し、機能性タンパク質として大量精製できる基盤を作ったことより、申請内容の多くを達成できたと考える。

We use the in vitro chemical acidification and anti-acidification technology to improve the quality of CHO-S cells, mammalian cells, and floating cells. In the first place, the CHO-S cells have been detected, the target cells have been detected, the infection rate has been detected in the sub-system, the GFP has been detected in the cells, the cells have been selected in the first place, and the cells in the cells have been stable and stable in the first place. Now we need to use c-Ab1, Abi-1, Mena, and so on. We need to make sure that you can make sure that you don't know what to do. Mena testing, testing, communication, testing, and testing. In this case, you can see that there is a situation in which you need to know that you are in a situation where you need to know that you are in a situation where you need to know that you are going to have a situation in which you want to know that you are going to have a problem. You can use YFP-actin to make sure that you are in a position to make sure that you are in a position to make sure that you are not in trouble. The results of the above results, the new regulations, the system of information management, the system of functional information management, and the application of a large number of information systems have been completed.