チロシンリン酸化酵素c-Ab1の機能解析

酪氨酸激酶c-Ab1的功能分析

• 批准号: 06J08815
• 负责人: 鈴木 淳
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyoto University (2007)Osaka University (2006)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J08815/
• 关键词: c-Ab1; Abi-1; Mena; CHO細胞; actin; c-Abl; リン酸化; GFP; GST; セルソーター

我々はこれまで、精製タンパク質を用いてin vitroでリン酸化反応の再構築を行うことを考え、哺乳類細胞で、浮遊培養が可能なCHO-S細胞を用いたタンパク質発現システムを構築した。このシステムは、レトロウイルスレセプターを発現させたCHO-S細胞に、目的遺伝子を組み込んだレトロウイルスを感染させ、マーカーとして用いたGFP高発現細胞をセルソーターにより選択することで、目的タンパク質安定高発現細胞を迅速かつ簡便に取得できるのが特徴である。現在このシステムを用いて、c-Ab1、Abi-1、Menaが発現精製できることは確認済みである。Menaに関しては、更にゲルろ過、イオン交換カラムを組み合わせることで精製度を上げ、4量体として精製されることが分かった。この精製タンパク質を、YFP-actinを発現させた細胞にマイクロインジェクトしイメージングを行ったところ、actinが葉状仮足様の構造状の部位に集積したことから、機能タンパク質として精製されていることも確認できた。以上の結果より、新規「タンパク質発現系」を構築し、機能性タンパク質として大量精製できる基盤を作ったことより、申請内容の多くを達成できたと考える。

I 々 は こ れ ま で, refined タ ン パ ク qualitative を with い て in vitro で リ ン acidification anti 応 の line to build を う こ と を え test, mammalian cell で, floating culture が may な CHO -s cells を using い た タ ン パ ク qualitative 発 now シ ス テ ム を build し た. こ の シ ス テ ム は, レ ト ロ ウ イ ル ス レ セ プ タ ー を 発 now さ せ た CHO cells -s に group, purpose but 伝 を み 込 ん だ レ ト ロ ウ イ ル ス を infection さ せ, マ ー カ ー と し て in い た GFP high 発 now cells を セ ル ソ ー タ ー に よ り sentaku す る こ と で, purpose タ ン パ ク quality stability and high 発 cell を か quickly now easy つ に で Youdaoplaceholder0 る が features である. Now, <s:1> システムを システムを uses システムを て, c-Ab1, Abi-1, Menaが to develop refined で る る と と confirmation of みである. Mena に masato し て は, more に ゲ ル ろ, イ オ ン exchange カ ラ ム を group み close わ せ る こ と で げ を system, 4 quantity body と し て refined さ れ る こ と が points か っ た. こ の refined タ ン パ ク を, YFP - actin を 発 now さ せ た cells に マ イ ク ロ イ ン ジ ェ ク ト し イ メ ー ジ ン グ を line っ た と こ ろ, actin が leaf 仮 foot others の に set product structure shape の parts し た こ と か ら, function タ ン パ ク qualitative と し て refined さ れ て い る こ と も confirm で き た. の above results よ り, new rules "タ ン パ ク qualitative 発 now is" を constructing し, functional タ ン パ ク qualitative と し て lots of refined で き る base plate を っ た こ と よ り, application content の く を reached で き た と exam え る.

项目成果

アダプタータンパク質を介したチロシンキナーゼc-Ablの活性制御

通过衔接蛋白调节酪氨酸激酶 c-Abl 活性

• 发表时间: 2006
• 期刊: 生化学 78巻6号
• 作者: 宍戸 知行;鈴木 淳;谷 佳津子
• 通讯作者: 谷 佳津子

NESH (Abi-3) is pre-sent in the Abi/WAVE complex but does not promote c-Abl-mediated phosphorylation

• DOI: 10.1016/j.febslet.2006.10.065
• 发表时间: 2006-11-27
• 期刊: FEBS LETTERS
• 影响因子: 3.5
• 作者: Hirao, Noriko;Sato, Seiichi;Tani, Katsuko
• 通讯作者: Tani, Katsuko

Regulation of cellular transformation by oncogenic and normal Ab1 kinases.

致癌和正常 Ab1 激酶对细胞转化的调节。

• 发表时间: 2008
• 期刊: Journal of biochemistry 141
• 作者: Jun Suzuki;Tomoyuki Shishido
• 通讯作者: Tomoyuki Shishido

アダプタータンパク質によるc-Ab1キナーゼの活性制御機構

衔接蛋白对 c-Ab1 激酶活性的调节

• 发表时间: 2007
• 作者: Jun Suzuki;Tomoyuki Shishido;鈴木 淳
• 通讯作者: 鈴木 淳

A rapid protein expression and purification system using Chinese hamster ovary cells expressing retrovirus receptor.

使用表达逆转录病毒受体的中国仓鼠卵巢细胞的快速蛋白质表达和纯化系统。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Journal of Biotechnology 126
• 作者: Suzuki;J.;Fukuda;M.;Kawata;S.;Maruoka;M.;Takeya;T.;Shishido T
• 通讯作者: Shishido T