血小板凝集因子Aggrusの分子生物学的解析とその臨床応用

血小板聚集因子Aggrus的分子生物学分析及其临床应用

基本信息

批准号：
06J10325
负责人：
加藤幸成
金额：
$ 2.18万
依托单位：
National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

癌細胞は血行性転移の際、血流中で血小板凝集を誘導し凝集塊を形成することが知られている。特に、転移能が高い癌細胞では血小板凝集能も高い傾向にある。癌細胞による血小板凝集は、血流中の癌細胞が2次臓器の微小血管にトラップされることを容易にすると考えられている。このように、癌細胞による血小板凝集が転移形成に重要であることが示唆されていたが、癌細胞上に発現している血小板凝集因子は同定されていなかった。本研究では、癌細胞上の血小板凝集因子の同定とその臨床応用を目的とした。過去の研究で、血小板凝集因子、転移促進因子であるaggrus遺伝子の同定に成功した。Aggrusは現在、リンパ管マーカーとして繁用されているpodoplaninとしても知られる。ヒトAggrusはマウスAggursとホモロジーが低いにも関わらず、マウスの血小板凝集をも引き起こした。詳細な変異実験により、EDXXVTPGという配列(PLAG domain)がAggrusの血小板凝集の活性中心であることを決定した。また、Aggrusによる血小板凝集活性には、PLAG domainのThrに付加されているO-結合型糖鎖のシアル酸が重要であることを証明した。今年度は、Aggrusの活性部位である糖鎖構造の解析を行った。抗ヒトAggrus抗体(NZ-1)を用いて、内在性のヒトpodoplaninの精製に初めて成功した。ヒトAggrusのPLAG domainには、数カ所のSer/Thr(O-結合型糖鎖の付加部位)が存在する。まず、Edman分解法により、N末がAla23であることがわかり、予想されていたよりもPLAG domainがN末端に近いことがわかった。さらに糖鎖付加部位を決定したところ、Thr32,Thr34,Thr35,Thr55,Ser56には糖鎖が付加されておらず、Thr52のみに糖鎖が付加されていることがわかった。23-57a.aの糖ペプチドをMSにょって解析したところ、disialyl-corel構造やmonosialyl-corel構造が付加されていることがわかった。

众所周知，在血源转移期间，癌细胞诱导血液中的血小板聚集并形成聚集质量。特别是，具有高转移性潜力的癌细胞往往具有高血小板聚集电位。人们认为癌细胞的血小板聚集可以促进被困在次生器官微血管中的血液中的癌细胞。因此，已经提出，癌细胞的血小板聚集对于转移形成很重要，但是尚未确定在癌细胞上表达的血小板聚集因子。这项研究旨在鉴定癌细胞及其临床应用的血小板聚集因子。先前的研究已成功鉴定出血小板团聚因子和Aggrus基因，这是一种促核因子。 Aggrus也称为Podoplanin，目前通常用作淋巴标记。尽管其与小鼠aggrus同源性低相同，但人类aggrus也会引起小鼠的血小板聚集。详细的突变实验确定序列EDXXVTPG（斑块结构域）是Aggrus中血小板聚集的活性中心。此外，已经证明，唾液酸是一种添加到斑块结构域THR中的O连接糖链，对于通过Aggrus的血小板聚集活性很重要。今年，我们分析了Glycan结构，该结构是Aggrus的活跃部位。使用抗人类Aggrus抗体（NZ-1）实现了内源性人脉肽的首次成功纯化。人类脂肪域中存在几个Ser/Thr（O连锁聚糖的其他位点）。首先，Edman的分解方法表明N端是ALA23，并且斑块结构域更接近N末端。此外，当确定糖基化位点时，发现不将糖基化添加到Thr32，Thr34，Thr35，Thr55，Thr55，Ser56中，并且只有THR52添加了糖基化。当通过MS分析23-57a.a的糖肽时，发现添加了抑制液和单溶素结构。