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ApoE蛋白質が制御するアミロイド線維の形成と除去の分子メカニズム

ApoE蛋白调控淀粉样原纤维形成和去除的分子机制

基本信息

批准号：
18770143
负责人：
古川良明
金额：
$ 2.3万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18770143/
关键词：
蛋白質凝集アミロイドアルツハイマー病 ApoE

项目摘要

ApoEは、アルツハイマー病患者の脳に見られる蛋白質沈着物(老人斑)の構成蛋白質として早くから同定されており、Aβのアミロイド形成を促進することが示唆されてきた。しかし、アルツハイマー病の神経病理がApoE遺伝子型により異なるという報告もあり、ApoEアイソフォームはアミロイドの化学的性質に影響を及ぼす可能性が考えられる。つまり、ApoEはアミロイド形成を制御する重要な蛋白質であると示唆されるが、その詳細な機構に関しては明らかでない。まず、ApoE蛋白質のアイソフォーム(E2,E3,E4)を大腸菌に発現させたところ、全てのアイソフォームにおいて毒性が認められた。そこで、培養温度を下げ緩やかな発現誘導を行うことで、培養液1LあたりmgオーダーでのApoE蛋白質の精製に成功した。一方、大腸菌においてAβペプチド単独ではその発現を認めることができなかったものの、GST蛋白質と融合させることで発現量を増加させ、精製後にプロテアーゼで切断することでAβペプチドを大量に得る手法を開発した。また、再構成Aβペプチドは一定時間後に直径が約10nmの線維状凝集物であるアミロイドを形成することを原子間力顕微鏡により確認した。ApoE蛋白質単独では線維状凝集物の形成を確認できなかったが、ApoE蛋白質はAβペプチドのアミロイド化を遅らせることが分かった。特に、Aβのアミロイド化を遅らせる効果はE3よりもE4の方が弱かったことから、脳内にAβアミロイドが蓄積するまでの時間がApoEの遺伝子型に依存する可能性が考えられた。

ApoE protein deposits (senile plaques) are seen in patients with ApoE disease. The effect of ApoE gene on the neuropathology and the possibility of ApoE gene mutation are discussed. ApoE is an important protein that controls the formation of apo and apo. ApoE protein expression in E. coli (E2,E3,E4) was detected in E. coli, and its toxicity was detected in E. coli. The purification of ApoE protein was successfully carried out in 1L culture medium. A method for producing large amounts of A β protein in E. coli, E. coli, GST protein and fusion protein was developed. After A certain period of time, linear aggregates with a diameter of about 10nm were formed and confirmed by atomic force microscopy. ApoE protein protein is isolated from the formation of linear aggregates. The results of the Aβ gene transformation are: E3, E4, E3, E4, E5, E4, E4, E5, E6, E6, E7, E8, E4, E7, E8, E8, E9, E9, E9,

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

家族性ALSに見られるSOD1蛋白質のアミロイド形成と翻訳後修飾過程による制御メカニズム

家族性 ALS 中观察到的淀粉样蛋白形成和 SOD1 蛋白翻译后修饰过程的控制机制

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
古川良明;金子貢巳;山中宏二;貫名信行
通讯作者：
貫名信行

Conversion to the amyotrophic lateral sclerosis phenotype is associated with intermolecular linked insoluble aggregates of SOD1 in mitochondria

DOI：
10.1073/pnas.0602046103
发表时间：
2006-05-02
期刊：
PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
影响因子：
11.1
作者：
Deng, HX;Shi, Y;Siddique, T
通讯作者：
Siddique, T

RNA-binding protein TLS is a major nuclear aggregate-interacting protein in huntingtin exon 1 with expanded polyglutamine-expressing cells