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バベシア原虫の宿主域決定機構の解明

巴贝虫原虫寄主范围决定机制的阐明

基本信息

批准号：
18780215
负责人：
中村一哉
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Toyama Institute of Health (2007)Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine (2006)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18780215/
关键词：
バベシア宿主域発現クローニング法 Cyclin依存性kinase

项目摘要

本研究では,バベシア原虫へ効率良く外来遺伝子を導入する系を確立し,これを用いた発現クローニング法によって,バベシア原虫の宿主域決定に関わる因子を同定することを目的としている。平成19年度は,Babesia boysのrap-1遺伝子上流ならびに下流領域とレポーター遺伝子を組み合わせてB.bovis用発現ベクターを構築した。最近報告された改良型電気穿孔法を用いて,この発現ベクターによるB.bovisへの外来遺伝子導入の有効性を確認した。続いてウマを宿主とするB.caballiから抽出したmRNAからcDNAライブラリーを作製し,前述の発現ベクターに組み込むことでB.caballcDNA発現ライブラリーを作製した。この発現ライブラリーをB.bovisに導入し、B.cabal1由来蛋白質の発現をB.caballi感染ウマ血清を用いた酵素抗体法により確認した。このB.caballi由来cDNAライブラリーが導入されたB.bovisをウマの赤血球で培養維持することで,ウマへの宿主域を獲得し,ウマの赤血球内で生残可能となった虫体の選別を試みたが,すべての虫体が死滅し,生残した虫体は確認できなかった。導入されたcDNAの偏りや発現の強弱についての検討や,より多量の検体を用いた遺伝子導入法の検討が必要であると考えられた。宿主域決定因子の同定に向けて,今後の課題も多く残すが,一連の実験により、バベシア原虫の宿主域決定機構の解明に向けた具体的な研究戦略を示した。一方で,Cyclin依存性kinaseがB.bovisの生活環成立には必須である可能性を証明した(Nakamura et al.,2007)。また,ヘパラン硫酸に代表される硫酸化複合糖質がバベシアによる赤血球侵入を拮抗阻害する現象も明らかにし(Bork et al.,2007),バベシア原虫の複雑な自己複製機構を解明する一助とした。

In this study, we established a system for the introduction of foreign genes into the host system, which was used to determine the factors related to host domain determination of protozoa. Heisei 19 years ago,Babesia boys rap-1 heritage son upstream and downstream areas, heritage son group, B.bovis with development site construction A recent report on the use of modified electroporation confirmed the effectiveness of the discovery of B.bovis and the introduction of foreign genes. B. caballi mRNA expression is controlled by B. caballi cDNA expression. B. caballi infection was confirmed by enzyme antibody method. The B.caballi cDNA was introduced into B.bovis and maintained in culture. The host domain of B. caballi was acquired. The selection of B. caballi was tested. It is necessary to study the method of gene introduction in order to improve the quality of gene expression. The determination of host domain determinants is the focus of future research, and specific strategies for understanding host domain determinants are proposed. One side,Cyclin dependent kinases B.bovis (Nakamura et al., 2007)。The phenomenon of inhibition of erythrocyte invasion by sulfated complex glycosaminoglycans was also observed (Bork et al., 2007), the first aid to the recovery of protozoa and its replication mechanism.