豚伝染性胃腸炎ウイルス感染防御への組織指向性偽ウイルス粒子の応用

组织亲性假病毒颗粒预防猪传染性胃肠炎病毒感染的应用

• 批准号: 02J04393
• 负责人: 中村 一哉
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine (2004)Osaka University (2002-2003)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J04393/
• 关键词: 豚伝染性胃腸炎ウイルス; バキュロウイルス; S蛋白; ウイルス様粒子; 組織指向性; ブタ伝染性胃腸炎ウイルス

豚伝染性胃腸炎ウイルス(TGEV)は感染個体に致死性下痢疾患を引き起こし、哺乳豚においては、ほぼ100%の致死率に達するなど、畜産業界において最も重要な病原体の一つである。しかし現時点ではTGEV感染防御に有効なワクチンは存在せず、その開発が望まれている。本研究では外来遺伝子の高発現系として広く用いられているバキュロウイルス発現系によりTGEVのウイルス様粒子を作出し、その組織指向性を利用して感染防御に重要な局所免疫誘導系の確立を目標として以下のような実験を行ってきた。TGEVの組織指向性決定には、エンビロープ蛋白の主要構成成分の一つであるS蛋白が重要であるとされている。そこでS遺伝子をクローニング、昆虫細胞発現ベクターに組み込み、S蛋白を発現する昆虫細胞の作製を行った。しかし昆虫細胞から発現した蛋白はブタ細胞への感染能付与効果が乏しく、これを改善するために、高度な糖鎖付加修飾が期待できる哺乳動物細胞における発現を試みた。プロモーター下流にS蛋白ならびにTGEV粒子形成必須蛋白であるM、E蛋白それぞれの遺伝子をつなげた発現ユニットを構築し、これらを組み込んだ各種バキュロウイルスを作出した。この組み換えウイルスを哺乳動物細胞に感染させることで、蛋白発現の確認を行った。続いて各種組み換えバキュロウイルスを同時感染させ、発現したTGEV蛋白によるウイルス様粒子(VLP)を形成させるため、至適なウイルス接種量を検討した。結果、細胞上清中にTGEV蛋白が検出されたため、粒子形成が行われていることが推察されたが、その量は微少であった。作出したVLPを各種実験に用いるに際しては、さらに高レベルでの粒子形成が必要であると考えられ、現在、細胞内での各種ウイルス蛋白の発現効率の改善を行っている。またこの系で作出されたVLPのブタ細胞への吸着能の検討も行っていく予定である。

Infectious gastroenteritis virus (TGEV) causes fatal diarrhea in infected individuals, has a mortality rate of 100% in mammals, and is one of the most important pathogens in the livestock industry. At present, there is no defense against TGEV infection, and there is no hope for development. The aim of this study is to establish an immune induction system that is important for infection defense by utilizing tissue orientation of TGEV and its high expression system. The tissue orientation of TGEV determines the main components of S protein. Insect cell production of S protein Insect cells develop proteins that infect mammalian cells and improve their ability to develop proteins that are highly resistant to sugar. The protein M and E are essential for the formation of TGEV particles. The expression of protein in mammalian cells was confirmed. In addition, the number of TGEV protein particles (VLP) formed during the incubation period was also investigated. As a result, TGEV protein was detected in cell supernatant, and particle formation was detected in a small amount. To improve the efficiency of particle formation in the production of various VLP proteins in cells. This system is designed for VLP cells and their sorption energy.

项目成果

Ikeda Y., Nakamura K., et al.: "High genetic stability of TM1 and TM2 strains of subtype B feline immunodeficiency virus in long-term infection."Journal of Veterinary Medical Science. 66(3). 287-289 (2004)

Ikeda Y.、Nakamura K. 等人：“B 亚型猫免疫缺陷病毒 TM1 和 TM2 株在长期感染中具有高遗传稳定性。”兽医医学杂志。

Nakamura M., Nakamura K., et al.: "Monoclonal antibodies that distinguish antigenic variants of canine parvovirus."Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 10(6). 1085-1089 (2003)

Nakamura M.、Nakamura K. 等人：“区分犬细小病毒抗原变体的单克隆抗体。”临床和诊断实验室免疫学。

Nakamura K., et al.: "Phylogenetic analysis of Vietnamese isolates of feline immunodeficiency virus : genetic diversity of subtype C."Archives of Viirology. 148(4). 783-791 (2003)

Nakamura K. 等人：“猫免疫缺陷病毒越南分离株的系统发育分析：C 亚型的遗传多样性”。病毒学档案。

High genetic stability of TM1 and TM2 stains of subtype B feline immunodeficiency virus in long-term infection.

B亚型猫免疫缺陷病毒TM1和TM2染色在长期感染中具有高遗传稳定性。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Journal of Veterinary Medical Science 66(3)
• 作者: Ikeda Y.;Nakamura K.;et al.
• 通讯作者: et al.

Kashima T., Nakamura K., et al.: "Overexpression of cadherins suppresses pulmonary metastasis of osteosarcoma in vivo."International Journal of Cancer. 104(2). 147-154 (2003)

Kashima T.、Nakamura K.等人：“钙粘蛋白的过度表达可抑制体内骨肉瘤的肺转移。”国际癌症杂志。