F0遺伝子ノックダウン法を用いた、心筋分化誘導・決定に関わる新規因子の同定と解析

F0基因敲低法鉴定和分析参与心肌分化诱导和测定的新因素

• 批准号: 18790213
• 负责人: 白井 学
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: National Cardiovascular Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790213/
• 关键词: 心臓発生; RNA干渉; 遺伝子ノックダウン法

本研究は,ES細胞のin vitroにおける分化系を用いたDNAマイクロアレイ法により選抜された候補遺伝子群(CACHE;Cardiogenesis Associated genes from chipassay of Embryo Bodies と命名)の中から,興味深い発現パターンを示す遺伝子について,その機能をFOマウス個体における遺伝子ノックダウン法を用いて高効率に解析する事を目的としている。本年度は,研究実施計画に基づき,下記の内容について研究を行った。1.候補遺伝子の詳細な発現パターン解析前年度から引き続き,選抜された遺伝子の発現パターンを,心臓発生初期から時期を追ってwhole-mount in situ hybridization法により解析した。その結果,初期の心臓原基で発現している遺伝子としてCACHE1,4,9,20,心内膜において特徴的な発現をする遺伝子としてCACHE9,20,更に,近年,多くの先天性心疾患に関係すると考えられる第二心臓形成領域(secondary heart field)関連遺伝子としてCACHE20,また,心筋及び骨格筋の発生への関与が予想される候補遺伝子としてCACHE65を同定した。この成果を元に,ES細胞のin vitroの分化系においても心内膜が発生する事を証明した。2.マウス個体における遺伝子ノックダウン法を用いた機能解析システムの構築と検討。候補遺伝子の一つであるCACHE20について,マウス個体における遺伝子ノックダウン法を試みたが,遺伝子発現量を変化させるまでには至らなかった。その行程において,効率良くRNA干渉を行えるsiRNAを選抜する方法の必要性が判明した。そのため,効率良くsiRNAを選抜する方法を構築を試みた。また,遺伝子ノックダウン法以外に,従来のノックアウト法を用いた変異マウスの作製及び機能解析も開始した。

In this study, the in vitro differentiation line of ES cells was selected using the Candidate Addendum Subgroup (CACHE; Cardiogenesis Associated genes from chip assay of Embryo Bodies) using the DNA Matrix Method.とnaming)の中から,interesting deep い発 appear パターンをshow す缝子について,その function をFOマウIt is an individual method that uses high-efficiency analysis and purpose. This year, we will study the basics of the implementation plan and write down the contents and conduct the research. 1. Candidates for the detailed analysis of the candidate for the last year, and the selection of the last year. The whole-mount in situ hybridization method is analyzed.そのresults, the initial stage of the cardiac primordium で発appears している缝子としてCACHE1,4,9,20, the endocardial primordium で発appears をする缝子としてCACHE9, 20, update, in recent years, the relationship between many congenital heart diseases and the second heart disease formation field (secondary heart field) related to the remaining 伝子としてCACHE20, また, the heart muscle and the びbone grid muscle の発生への Off and the がyuxiang される candidate addendum 伝子としてCACHE65を同定した. The result is the original one, and the differentiation line of ES cells in vitro has been proven. 2. The method of analyzing the individual functions and constructing the マウス individual における伝子ノックダウン method. Candidate 缝子の一つであるCACHE20について,マウス individually における缝子The ノックダウン法をtestみたが, the remaining 伝子発开户を変化させるまでには to らなかった.その行において, efficient くRNA interference 渉を行 えるsiRNA を selection 抜する method and necessity が clarified した.そのため, efficient siRNA を selection 抜する method を construction を test みた.また, the remaining ノックダウン法に, the 従来のノックアウト法を用いた変different マウスのproduction and びfunctional analysisもstart した.

项目成果

心臓の領域化に関与するTbx2の機能解析

Tbx2参与心脏区域化的功能分析

• 发表时间: 2007
• 作者: Atsushi;Suzuki;Hiromi Terami;白井 学
• 通讯作者: 白井 学