リソゾーム病の神経病変を標的とした新規遺伝子治療の開発

针对溶酶体疾病神经病变的新型基因疗法的开发

基本信息

批准号：
18790235
负责人：
三宅紀子
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Nippon Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

リソゾーム酵素欠損症(以下リソゾーム病)は、精製した欠損酵素を定期的に静脈注射する酵素補充療法の有効性が確認されている。しかし、アリルスルファターゼA(ASA)の欠損症である異染性白質ジストロフィー(MLD)のような神経変性を伴う疾患に対しては血液脳関門(BBB)の存在が大きな障害となり、有効な治療戦略が立てられていない。本研究ではMLDの神経症状を非侵襲的に治療する新しいアデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターの開発を目的とし、細胞膜通過活性をもつているHIVのTat配列とASAのキメラ蛋白遺伝子をAAVベクターに組み込み、遺伝子導入効率、発現効率の高い8型組替えAAVベクターを作製した。このベクターを6週令のMLDモデルマウスに静脈注射し、血清中のASA蛋白の推移を検討したところ、静脈注射後2週前後で高濃度のASAが検出されるもその後徐々に低下し、1ケ月後には検出不可能となった。これらのマウスにはASA中和抗体の上昇が認められ、また、同じベクターを免疫不全マウスに静脈注射したところ、長期にわたり高濃度のASA蛋白が認められたことにより、免疫反応の関与が示唆された。これを克服すべく、同じベクターを用いて新生児のMLDモデルマウスに静脈注射したところ、長期にわたり血清中のASA蛋白が認められ免疫寛容が認められた。新生児においては免疫反応、BBBともに未熟であり、AAVベクターの新生時時期における静脈注射はMLDのような神経症状を伴うリソゾーム病に有用な治療法になると考えられた。

溶酶体酶缺乏症（以下称为溶酶体疾病）已被证实在酶替代疗法中有效，其中纯净的缺乏酶静脉注射纯净的缺乏酶。然而，对于具有神经变性的疾病，例如元基因白细胞营养不良（MLD）（MLD），这是烯丙基硫酸酯酶A（ASA）的缺乏，因此血脑屏障（BBB）的存在是主要障碍，并且尚未开发出有效的治疗策略。在这项研究中，我们旨在开发一种新的与腺相关的病毒（AAV）载体，该病毒（AAV）载体无创地处理MLD的神经系统症状，并且我们纳入了具有跨膜活性的HIV的TAT序列，并且ASA的嵌合蛋白基因在AAV载体中产生了AAV载体，以使AAV载体具有高度转移的效率，并具有高度的A型AAV vecorde and Gene Enee效率。将该载体静脉注射到6周旧的MLD模型小鼠中，以检查血清中ASA蛋白的进展，当静脉注射后2周检测到高浓度的ASA时，它逐渐减少并在一个月后无法检测到。这些小鼠显示ASA中和抗体的增加，并且当将免疫功能低下的小鼠与相同载体静脉注射时，很长一段时间内观察到高浓度的ASA蛋白，这表明免疫反应的参与。为了克服这一点，使用同一载体静脉注射新生MLD模型小鼠，并长时间观察到血清ASA蛋白，从而导致免疫耐受性。在新生儿中，免疫反应和BBB都不成熟，在新生儿出生过程中静脉注射AAV载体被认为是对具有MLD等神经症状的溶酶体疾病的有用治疗方法。