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肝再生不全新規治療法の開発を目指した肝発生分子基盤の解析

分析肝脏发育的分子基础，旨在开发治疗肝再生失败的新疗法

基本信息

批准号：
18790753
负责人：
近藤宏樹
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Research Institute, Osaka Medical Center for Maternal and Child Health
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790753/
关键词：
肝発生器官培養 Hnf4α 肝細胞 SSH

项目摘要

マウス発生初期肝臓に発現する遺伝子のスクリーニングを行うため,まず肝臓が発生して1日目の胎生9.5日胚から肝臓を単離し,器官培養することに成功した。この器官培養系を用いて,申請者は,このHnf4αを器官培養胎仔肝に強制的に発現させて細胞内遣伝子を撹乱し,対照として同じくLacZを導入して24時間器官培養後,mRNAを抽出した。このmRNAを鋳型としてcDNA合成を行い,この2つのcDNAに対し,suppression subtractive hybridization法を用いてmRNAの発現プロファイルの違いを比較しmRNAの量が増加または減少したものを同定した。その結果,肝特異的アミノ酸トランスポーターsodiuim-coupled neutral amino acid transporter 4(SNAT4)や蛋白修飾因子Spcs 2,クロマチン構成因子H2afzが肝発生期に発現している有望な分子として同定できた。申請者は,SNAT4につき更なる解析を進め,定量PCRにて肝発生過程におけるmRNAレベルの経時的な発現の変化を調べると,SNATファミリーの中でSNAT4が最も優位に発現しており,少なくともE9.5日から発現し,胎生後期に急激に増加することを見いだした(2007年米国肝臓学会にて発表)。また申請者は,マウスSNAT4をコードする遺伝子Slc38a4の上流約3.7kbの領域をクローニングした。レポーターベクターを構築し,レポーターアッセイにて転写活性化能を測定すると,Slc38a4はHnf4αにより転写が活性化されることが判明した(2007年米国肝臓学会にて発表)。この成果に基づいて,現在,論文投稿準備中である。

The first stage of liver development, the first stage of liver development, the second stage of liver development, the third stage of liver development, the first stage of liver development, the third stage of liver development, the fourth stage of organ culture, the fourth stage of liver development, the fourth stage of liver In the case of organ culture system, the applicant responded that Hnf4 α gene expression in fetal liver stress in organ culture was disturbed by intracellular gene expression, and LacZ gene expression was extracted after 24 hours of organ culture. In the process of cDNA synthesis, the expression of mRNA was increased and decreased by suppression subtractive hybridization. As a result, liver-specific amino acid transporter 4(SNAT4), protein modifier Spcs2, and component H2afz are expected to develop during liver development. The applicant responded that SNAT4 was the most optimal for the analysis of SNAT4, and that SNAT4 was the most optimal for the regulation of mRNA expression during liver development by quantitative PCR, and that SNAT4 was the most optimal for the detection of SNAT4, and that SNAT4 The applicant responded to the request for SNAT4, which is an upstream domain of approximately 3.7 kb. The activity of the enzyme was determined by SLC 38a4 α and SLC 38a4 α (2007 American Liver Society). This paper is currently being prepared for submission.