イノシン特異的mRNA切断によるADAR1基質同定と遺伝性対側性色素異常症病態解明

通过肌苷特异性 mRNA 切割鉴定 ADAR1 底物并阐明遗传性​​对侧色素异常的发病机制

• 批准号: 18790784
• 负责人: 河野 通浩
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790784/
• 关键词: RNA編集; 色素細胞; 角化細胞; ADAR1; チロシナーゼ; MART-1

前年度(H18年度)には、ADAR1遺伝子の発現ベクターを作製し、色素細胞および角化細胞に導入し、ADAR1を過剰発現させた。その際の色素関連遺伝子であるチロシナーゼおよびMART-1についての発現量の変化をmRNAレベルで調べたところ、有意な変化は見られなかった。本年度は、上記の結果をふまえて、(1)本研究で用いるイノシン特異的mRNA切断によるADAR1編集基質同定手法の検討および(2)正常色素細胞においてsiRNAを用いたADAR1遺伝子発現抑制を起こした際のDNAマイクロアレイを用いた包括的遺伝子発現変化の観察を進めた。(1)のイノシン特異的mRNA切断を行うためには、多くのステップについて予備実験による条件設定が必要である。本実験への準備を進めているが、いまだ本実験に進むための条件設定は進んでいない。(2)については、ADAR1遺伝子のsiRNAを設計して、遺伝子抑制させた時のチロシナーゼおよびMART-1についての発現量の変化をmRNAレベルで調べたところ、有意な変化は見られなかった。現在まで明らかになっていない、ADAR1遺伝子抑制によって影響を受ける遺伝子を明らかにするため、正常色素細胞及び角化細胞でADAR1を抑制させ、DNAマイクロアレイを用いて包括的遺伝子発現変化を観察した。遺伝子の発現の変化はいくつかの遺伝子で見られたため、現在、リアルタイムPCRを用いて、マイクロアレイで得られた結果の確認実験を進めている。また、我々のグループで継続的に行っている遺伝性対側性色素異常症患者のADAR1遺伝子変異の検索は続けて行っている。

在上一年（2006年）中，制备了ADAR1基因的表达矢量，引入了色素细胞和角质形成细胞，并且ADAR1过表达。当在mRNA水平上检查与色素相关基因酪氨酸酶和MART-1的表达水平的变化时，找不到显着变化。基于上述结果，我们使用了本研究中使用的肌苷特异性mRNA裂解进行了对ADAR1编辑的底物鉴定方法的研究，（2）当使用ADAR1基因表达使用siRNA使用siRNA在正常的色素细胞中抑制ADAR1基因表达时，对使用DNA微阵列进行了全面基因表达变化的观察。为了在（1）中执行肌苷特异性mRNA裂解，许多步骤都需要初步的实验条件。我们目前正在为该实验做准备，但是尚未设定该实验的条件。关于（2），当设计了ADAR1基因的siRNA并在抑制ADAR1基因的siRNA时在mRNA水平上检查酪氨酸酶和mart-1的表达水平的变化时，找不到显着变化。为了阐明受ADAR1基因抑制影响的基因，直到现在才揭示，在正常的色素细胞和角质形成细胞中抑制了ADAR1，并使用DNA微阵列观察到了基因表达的全面变化。由于在几个基因中观察到基因表达的变化，因此我们目前正在进行实验，以确认使用实时PCR通过微阵列获得的结果。此外，我们的小组继续在遗传对侧色素病患者中寻找ADAR1基因突变。

项目成果

特発性脳内石灰化症を合併した遺伝性対側性色素異常症の1例

遗传性对侧色素沉着障碍并发特发性脑内钙化一例

• 发表时间: 2007
• 作者: T. Suzuki;S. Ito;T. Kondo;Y. Tomita;坂井 香織;鈴木 民夫;河野 通浩;近藤 泰輔;鈴木 民夫;三橋 善比古;鈴木 民夫;三浦 歩;近藤 泰輔
• 通讯作者: 近藤 泰輔

新規遺伝子変異を認めた遺伝性対側性色素異常症の4例

新型基因突变遗传性对侧色素沉着障碍四例

• 发表时间: 2007
• 作者: T. Suzuki;S. Ito;T. Kondo;Y. Tomita;坂井 香織;鈴木 民夫;河野 通浩;近藤 泰輔
• 通讯作者: 近藤 泰輔