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マウス眼色素上皮細胞における抑制分子遺伝子発現の網羅的解析

小鼠眼色素上皮细胞抑制分子基因表达综合分析

基本信息

批准号：
18791264
负责人：
岩永洋一
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

虹彩色素上皮細胞(IPE)や網膜色素上皮細胞(RPE)はC57BL/6マウスから眼球摘出し、虹彩や網膜組織を取り出し、酵素処理して2週間特殊な培地で培養する事で樹立した。コントロールに毛様体色素上皮細胞(CBPE)を用いた。培養したこれらの眼色素上皮細胞は抗サイトケラチン抗体を用いてフローサイトメトリーにて色素上皮細胞であるかどうか確認したところ90%以上が陽性を示した。抑制T細胞としてC57BL/6マウスの脾臓から脾細胞を取り出し、CD4^+またはCD8^+T細胞を採取した。このT細胞をIPEまたはRPEと共生培養し、X線照射して使用した。ターゲットとして活性化T細胞をanti-CD3 antibody、anti-CD28 antibodyをT細胞に加えて72時間培養またはMixed lymphocyte reaction (MLR)を96時間培養して樹立した。In vitroの眼色素上皮細胞あるいは眼色素上皮由来抑制T細胞の活性化T細胞の抑制能の評価は細胞増殖試験(サイミジン取り込み試験、flow cytometryを用いたCFSE取り込み試験)、培養上清中のサイトカイン産出能(IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、TGF-beta)にて検討したところ、眼色素上皮やその抑制T細胞は有意に活性化T細胞を抑制していた。さらに、網膜可溶性抗原のIRBP (interphotpreceptor retinoid binding protein)をアジュバントと共に免疫する事で細胞性免疫応答性ぶどう膜炎を誘導した。14,21日後のマウス眼底所見で炎症を確認したところEAUスコアで2-3ぐらいの眼内炎症が惹起されていた。In vitroで樹立した眼色素上皮誘導抑制T細胞をX線照射しEAUの発症後にその炎症を惹起しているマウスに移入してみたところ炎症抑制が認められた。また、マウスマイクロアレイを用いて網羅的に遺伝子検索したところRPE細胞が新しい免疫抑制因子、cytotoxic T lymphocyte antigen2を発現し、その抑制T細胞誘導に関与していた。現在、追加実験で確認中で、今後学会や論文で発表予定である。

Iridescent pigment epithelial cells (IPE) and omental pigment epithelial cells (RPE) are extracted from the eyeballs of C57BL/6 マウスから, iris omental tissue is extracted and extracted, and enzyme treatment is performed in a special field and cultured in 2 weeks and established. Codontochrome pigment epithelial cells (CBPE) are used. Cultured eye pigment epithelial cells and anti-Saturation antibodies were used. The pigmented epithelial cells of the Terythropoietin are confirmed to be positive and more than 90% are positive. Inhibition of T cells C57BL/6 マウスの spleen cells から splenocytes を taken out し, CD4^+ または CD8^+ T cells を taken out した. Use of T cells, IPE, RPE, symbiotic culture, and X-ray irradiation.ターゲットとしてActivated T cellsをanti-CD3 antibody, anti-CD28 antibodyをT cells were cultured for 72 hours and Mixed lymphocyte reaction (MLR) was cultured for 96 hours and established. In vitro eye pigment epithelial cells, origin of eye pigment epithelium, inhibition of activation of T cells, inhibition of T cells, evaluation of cell proliferation test, flow Cytometry was carried out using CFSE, and the culture supernatant was tested for its production capacity (IFN-γ, IL-2, and IL-4). , IL-10, TGF-beta) にて検検したところ, ocular pigment epithelium やその suppresses T cells, intentionally activates T cells, and suppresses していた. The omentum soluble antigen, IRBP (interphotpreceptor retinoid binding protein), is used to induce inflammation of the immune system. 14. The inflammation seen in the fundus of the eye after the 21st was confirmed. The inflammation in the eye was caused by EAU 2-3. In In vitro establishment of ocular pigment epithelium-induced suppressive T cells and EAU after X-ray irradiationにそのinflammatoryをcausesしているマウスにmoving intoしてみたところinflammatory suppressionがcognizeめられた.また, マウスマイクロアレイを Use the いて snare of に伝子検SO したところRPE cells が新しいimmunosuppressive factor, cytotoxic T lymphocyte The presence of antigen2 and its inhibitory effect on T cell induction are closely related to its function. Now, we have added that the project is being confirmed and the thesis list of the future society will be decided.